賽默飛分光光度計NanoDrop Eight實驗流程

一、引言

NanoDrop Eight是賽默飛公司推出的八通道微量紫外-可見分光光度計，它繼承了NanoDrop系列的超微量檢測優(yōu)勢，并在通量和自動化方面實現(xiàn)突破。該設(shè)備能在1–2 μL的樣品體積下快速完成核酸、蛋白質(zhì)等生物分子的濃度和純度分析，并支持八個樣品同時檢測。規(guī)范化的實驗流程不僅能保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠，還能提升實驗室的整體效率。

二、實驗前準(zhǔn)備

1. 儀器檢查

• 打開電源，確保系統(tǒng)正常啟動。

• 等待開機(jī)自檢完成，檢查光源狀態(tài)是否正常。

• 確認(rèn)檢測平臺干凈無殘留液滴。

2. 耗材與工具

• 微量移液器及配套槍頭。

• 無核酸酶水或去離子水，用于清潔。

• 棉簽或無塵紙，用于擦拭檢測平臺。

• 樣品緩沖液或?qū)φ杖軇?，作為空白對照?/p>

3. 樣品準(zhǔn)備

• 核酸或蛋白樣品需溶于合適緩沖液。

• 確保樣品濃度處于NanoDrop Eight檢測范圍。

• 在檢測前輕輕混勻，避免沉淀和濃度梯度。

三、實驗操作流程

1. 開機(jī)與軟件啟動

• 啟動NanoDrop Eight主機(jī)與操作軟件。

• 在界面中選擇實驗?zāi)Ｊ?，例如核酸定量、蛋白檢測或全光譜掃描。

2. 空白測定

• 使用溶解樣品的緩沖液作為空白。

• 在檢測平臺上加1–2 μL空白液，關(guān)閉上臂，點擊“Blank”。

• 系統(tǒng)自動完成背景吸收扣除。

3. 樣品檢測

• 在檢測位置依次滴加樣品，每個位置1–2 μL。

• 放下上臂，點擊“Measure”，儀器會依次完成八個通道的檢測。

• 軟件自動顯示濃度、260/280比值、260/230比值以及完整光譜。

4. 多輪檢測

• 若樣品數(shù)量大于八個，可分批次進(jìn)行。

• 每批次檢測前均需重新進(jìn)行空白測定，以保證準(zhǔn)確性。

5. 數(shù)據(jù)保存

• 每次測定結(jié)果自動記錄，可批量導(dǎo)出為Excel、PDF等格式。

• 可直接上傳至實驗室信息管理系統(tǒng)，實現(xiàn)集中管理。

四、數(shù)據(jù)分析與結(jié)果解讀

1. 核酸檢測

• 濃度：根據(jù)A260值計算DNA或RNA濃度。

• 純度：260/280比值判斷蛋白污染；260/230比值判斷鹽類或酚污染。

• 光譜曲線：完整掃描幫助確認(rèn)是否存在雜質(zhì)峰。

2. 蛋白質(zhì)檢測

• A280法：直接檢測芳香族氨基酸吸收。

• 比色法：結(jié)合Bradford或BCA方法，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

3. 數(shù)據(jù)可靠性判斷

• RSD（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差）<2%通常代表結(jié)果重復(fù)性良好。

• 若出現(xiàn)異常比值或光譜，應(yīng)重新檢測并檢查樣品質(zhì)量。

五、實驗注意事項

1. 加樣準(zhǔn)確：移液操作需穩(wěn)準(zhǔn)，保證樣品完全覆蓋光學(xué)平臺。

2. 防止交叉污染：每次檢測后必須清潔平臺，避免殘留干擾。

3. 空白選擇：必須與樣品溶劑一致，否則會引入系統(tǒng)誤差。

4. 環(huán)境要求：保持實驗室溫度穩(wěn)定，避免強(qiáng)光直射。

5. 重復(fù)檢測：關(guān)鍵樣品建議至少三次測量取均值。

六、質(zhì)量控制與維護(hù)

1. 定期校準(zhǔn)

• 使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片進(jìn)行波長校準(zhǔn)。

• 使用標(biāo)準(zhǔn)吸光度溶液進(jìn)行光度校準(zhǔn)。

2. 儀器自檢

• 每次開機(jī)后，系統(tǒng)自動執(zhí)行光源和光學(xué)檢測。

• 若提示異常，應(yīng)停止實驗并聯(lián)系維護(hù)人員。

3. 清潔與保養(yǎng)

• 每次實驗后用去離子水擦拭平臺。

• 避免使用腐蝕性清潔劑，以免損壞光學(xué)部件。

• 定期更換易耗部件（如光源），保證長期穩(wěn)定性。

七、典型應(yīng)用流程案例

1. 質(zhì)粒DNA檢測

• 使用TE緩沖液作為空白。

• 測量結(jié)果：濃度符合轉(zhuǎn)染要求時可直接使用；若260/280比值偏低，應(yīng)進(jìn)一步純化。

2. RNA提取檢測

• 空白為無RNA酶水。

• 結(jié)果中若260/230比值低，提示鹽或酚污染，需要重復(fù)提取或純化。

3. 蛋白表達(dá)檢測

• 空白為PBS緩沖液。

• 通過A280法檢測蛋白濃度，并結(jié)合比色法交叉驗證。

八、實驗心得與經(jīng)驗總結(jié)

1. NanoDrop Eight相比傳統(tǒng)單通道儀器，通量更高，效率提升顯著。

2. 微量加樣對操作者要求較高，操作熟練后可大幅提高重復(fù)性。

3. 在高通量測序建庫前，利用NanoDrop快速篩選RNA樣品，能有效節(jié)省測序成本。

4. 教學(xué)中使用NanoDrop Eight，學(xué)生能直觀理解核酸和蛋白質(zhì)的吸收特性，實驗興趣更高。

5. 數(shù)據(jù)導(dǎo)出與LIMS對接，使實驗室管理更加高效。

九、未來展望

隨著實驗室智能化的發(fā)展，NanoDrop Eight的實驗流程有望進(jìn)一步簡化與升級：

• 自動化加樣系統(tǒng)：減少人工誤差。

• 智能算法輔助：自動識別異常光譜并給出修正建議。

• 遠(yuǎn)程數(shù)據(jù)監(jiān)控：實驗結(jié)果可實時上傳云端，便于多團(tuán)隊共享。

• 集成質(zhì)控模塊：未來或可在每次檢測時自動執(zhí)行精度驗證。

十、結(jié)語

NanoDrop Eight為核酸、蛋白及多種生物樣品提供了快速、準(zhǔn)確和高效的檢測手段。規(guī)范化的實驗流程涵蓋了從樣品準(zhǔn)備、檢測操作到結(jié)果解讀的完整步驟。通過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和合理的實驗設(shè)計，該設(shè)備不僅提升了實驗效率，也保證了檢測結(jié)果的可靠性。對于現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗室而言，NanoDrop Eight已成為不可或缺的核心檢測平臺。