賽默飛分光光度計(jì)NanoDrop Eight注意事項(xiàng)

一、前言

NanoDrop Eight是賽默飛推出的一款高通量微量分光光度計(jì)，具有一次同時(shí)測(cè)量8個(gè)樣品、樣品體積低至12 μL、波長(zhǎng)覆蓋190850 nm的優(yōu)勢(shì)，被廣泛用于核酸、蛋白及其他生物樣品的檢測(cè)。雖然該儀器具有高度自動(dòng)化與簡(jiǎn)便化的操作流程，但作為精密光學(xué)設(shè)備，合理使用與維護(hù)仍然十分關(guān)鍵。掌握注意事項(xiàng)能夠幫助實(shí)驗(yàn)人員減少誤差、延長(zhǎng)儀器壽命，并提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。

二、使用前注意事項(xiàng)

1. 環(huán)境要求

• 溫度：保持在20~25℃，避免溫度劇烈波動(dòng)。

• 濕度：控制在60%以下，過(guò)高濕度可能導(dǎo)致光學(xué)器件受潮。

• 光照與震動(dòng)：遠(yuǎn)離強(qiáng)光直射與震動(dòng)源，避免外界干擾。

2. 電源條件

• 使用穩(wěn)定電源，避免與高功率設(shè)備共用插座。

• 建議使用帶穩(wěn)壓功能的電源插板，減少電壓波動(dòng)。

3. 儀器檢查

• 開(kāi)機(jī)后等待3~5分鐘預(yù)熱，使氙閃光燈穩(wěn)定。

• 檢查檢測(cè)平臺(tái)是否潔凈，無(wú)殘留液滴或塵埃。

• 確認(rèn)樣品臂運(yùn)轉(zhuǎn)正常。

4. 軟件準(zhǔn)備

• 提前設(shè)置數(shù)據(jù)存儲(chǔ)路徑。

• 檢查軟件是否為最新版本，確保功能完整。

三、樣品處理注意事項(xiàng)

1. 樣品濃度與體積

• NanoDrop Eight檢測(cè)范圍廣，但仍需保證樣品濃度在檢測(cè)區(qū)間內(nèi)。

• 對(duì)于濃度過(guò)高的核酸或蛋白，應(yīng)進(jìn)行稀釋。

• 樣品體積需嚴(yán)格控制在1.5~2 μL，避免過(guò)多或不足。

2. 緩沖液選擇

• 避免使用含高濃度鹽或有機(jī)溶劑的緩沖液，這些成分會(huì)在230 nm處產(chǎn)生干擾。

• 核酸樣品推薦使用無(wú)RNA酶/無(wú)DNA酶水，蛋白樣品推薦使用PBS或Tris緩沖液。

3. 樣品狀態(tài)

• 保證樣品均一，無(wú)沉淀或絮狀物。

• 檢測(cè)前充分混勻，避免局部濃度差異。

• 上樣時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡。

4. 空白對(duì)照

• 每次檢測(cè)必須使用與樣品一致的緩沖液作為空白，進(jìn)行基線校正。

四、操作過(guò)程注意事項(xiàng)

1. 上樣

• 使用移液器吸取樣品，避免吸頭內(nèi)殘留氣泡。

• 將液滴準(zhǔn)確置于檢測(cè)平臺(tái)中央。

• 不要讓液滴接觸到平臺(tái)邊緣，以免影響光路。

2. 關(guān)閉樣品臂

• 液滴覆蓋窗口后，應(yīng)立即關(guān)閉樣品臂，防止蒸發(fā)。

• 操作時(shí)力度適中，避免損傷平臺(tái)。

3. 測(cè)定模式選擇

• 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適模式：

• 核酸模式（260 nm）

• 蛋白模式（280 nm或顯色法）

• OD600模式（細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)）

• 全光譜掃描模式（190~850 nm）

• 模式選擇錯(cuò)誤會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。

4. 多通道測(cè)量

• 同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品時(shí)，保持樣品上樣體積一致。

• 建議順序操作，避免因等待過(guò)久導(dǎo)致液滴蒸發(fā)。

五、數(shù)據(jù)解讀注意事項(xiàng)

1. 核酸檢測(cè)

• 260/280比值：1.8左右為DNA純凈，約2.0為RNA純凈。

• 260/230比值：2.0~2.2為理想范圍，低于此值可能有鹽或有機(jī)物污染。

2. 蛋白檢測(cè)

• A280法：適合高純度蛋白。

• 顯色法：適合復(fù)雜體系，需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。

• 光譜解讀：若230 nm吸收過(guò)高，提示緩沖液成分干擾。

3. 細(xì)胞與菌液檢測(cè)

• OD600值：用于判斷細(xì)胞密度或細(xì)菌生長(zhǎng)階段。

• 樣品需充分混勻，避免分層。

4. 全光譜掃描

• 可用于未知樣品或質(zhì)量控制。

• 異常吸收峰提示可能存在雜質(zhì)。

六、維護(hù)與保養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 檢測(cè)平臺(tái)清潔

• 每次檢測(cè)結(jié)束后，用無(wú)RNA酶水或70%乙醇清潔。

• 避免殘留液滴干固在窗口上。

• 不可使用金屬工具刮擦，以免劃傷光學(xué)表面。

2. 光源與光學(xué)系統(tǒng)

• 氙燈壽命較長(zhǎng)，但需避免頻繁開(kāi)關(guān)機(jī)。

• 如發(fā)現(xiàn)光譜漂移，應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)或聯(lián)系廠家維護(hù)。

3. 軟件與數(shù)據(jù)管理

• 定期備份數(shù)據(jù)，避免丟失。

• 建議實(shí)驗(yàn)室建立統(tǒng)一的數(shù)據(jù)命名與存檔規(guī)范。

4. 長(zhǎng)期存放

• 長(zhǎng)期不用時(shí)，應(yīng)斷開(kāi)電源，并用防塵罩覆蓋。

• 保持環(huán)境干燥，避免光學(xué)部件受潮。

七、常見(jiàn)問(wèn)題及經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

1. 信號(hào)不穩(wěn)定

• 原因：樣品蒸發(fā)、氣泡、平臺(tái)不干凈。

• 經(jīng)驗(yàn)：快速操作并保持平臺(tái)清潔。

2. 樣品濃度異常

• 原因：緩沖液干擾或稀釋不當(dāng)。

• 經(jīng)驗(yàn)：檢查緩沖液成分，必要時(shí)更換。

3. 多次測(cè)量差異大

• 原因：上樣體積不一致或樣品混勻不足。

• 經(jīng)驗(yàn)：操作需規(guī)范，保持體積一致。

4. 光譜曲線異常

• 原因：樣品純度低或光路受污染。

• 經(jīng)驗(yàn)：檢查樣品質(zhì)量，必要時(shí)重新純化。

八、良好實(shí)驗(yàn)習(xí)慣建議

1. 每次實(shí)驗(yàn)前后，養(yǎng)成清潔檢測(cè)平臺(tái)的習(xí)慣。

2. 樣品檢測(cè)盡量一次性完成，減少蒸發(fā)影響。

3. 對(duì)重要樣品重復(fù)檢測(cè)三次，取平均值。

4. 在科研工作中，保存完整光譜數(shù)據(jù)而非單一濃度值，便于后續(xù)分析與復(fù)查。

5. 建立實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作流程，統(tǒng)一數(shù)據(jù)命名與記錄格式。

九、總結(jié)

NanoDrop Eight分光光度計(jì)以其快速、高效和靈敏的特點(diǎn)，在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用。然而，它是一臺(tái)對(duì)操作細(xì)節(jié)極為敏感的精密儀器。使用者需在樣品準(zhǔn)備、上樣操作、模式選擇、數(shù)據(jù)解讀和日常維護(hù)等環(huán)節(jié)嚴(yán)格遵循規(guī)范。通過(guò)總結(jié)和遵守上述注意事項(xiàng)，既能確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，也能延長(zhǎng)儀器使用壽命，提升實(shí)驗(yàn)室整體運(yùn)行效率。