賽默飛分光光度計(jì)NanoDrop Eight測(cè)試流程

一、前言

NanoDrop Eight是賽默飛推出的一款高性能多通道微量分光光度計(jì)，繼承了NanoDrop系列在核酸、蛋白質(zhì)等生物樣品微量檢測(cè)方面的優(yōu)勢(shì)，并通過八通道并行設(shè)計(jì)大幅提升了檢測(cè)效率。其測(cè)試流程設(shè)計(jì)兼顧高精度和簡便性，使研究人員能夠在分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、藥物研發(fā)和臨床檢測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域快速獲得可靠數(shù)據(jù)。

測(cè)試流程是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性與可重復(fù)性的關(guān)鍵。本文將系統(tǒng)介紹NanoDrop Eight的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試流程，包括樣品準(zhǔn)備、儀器開機(jī)與校準(zhǔn)、檢測(cè)步驟、數(shù)據(jù)分析與結(jié)果輸出、維護(hù)與常見問題處理等，幫助科研人員全面掌握該設(shè)備的使用要點(diǎn)。

二、NanoDrop Eight的測(cè)試基本原理

1. 微量檢測(cè)理念

傳統(tǒng)分光光度計(jì)需要500 μL以上樣品，而NanoDrop Eight僅需1–2 μL即可完成檢測(cè)。其核心原理是利用兩根光纖臂之間的液體橋構(gòu)成光路，光程固定且可自動(dòng)調(diào)整。

2. 光程調(diào)節(jié)

NanoDrop Eight能根據(jù)樣品濃度自動(dòng)選擇合適的光程（1 mm、0.2 mm或0.05 mm），保證在寬濃度范圍內(nèi)保持檢測(cè)精度。

3. 光電檢測(cè)

樣品對(duì)紫外-可見光的吸收由硅光二極管陣列檢測(cè)，輸出電信號(hào)，再結(jié)合朗伯-比爾定律計(jì)算濃度。

4. 八通道并行

儀器配置8個(gè)檢測(cè)通道，可同時(shí)檢測(cè)8個(gè)樣品，極大提升實(shí)驗(yàn)效率，適合高通量研究。

三、測(cè)試前準(zhǔn)備

1. 樣品制備

• 體積：每個(gè)檢測(cè)點(diǎn)通常需要1–2 μL樣品；

• 濃度：DNA樣品范圍2–15,000 ng/μL，蛋白質(zhì)范圍0.1–200 mg/mL；

• 純度：避免沉淀、雜質(zhì)或氣泡，以免影響光路。

2. 清潔與校準(zhǔn)

• 清潔平臺(tái)：用無核酸酶水或70%乙醇擦拭檢測(cè)平臺(tái)，確保無殘留；

• 空白對(duì)照：準(zhǔn)備與樣品相同的緩沖液或溶劑作為基線校正。

3. 軟件準(zhǔn)備

• 啟動(dòng)NanoDrop Eight軟件；

• 選擇檢測(cè)模式（核酸、蛋白質(zhì)、熒光標(biāo)記物、動(dòng)力學(xué)等）；

• 建立實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目文件夾，便于數(shù)據(jù)保存和管理。

四、標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試流程

1. 開機(jī)與初始化

• 打開主機(jī)電源；

• 連接電腦與軟件，確認(rèn)儀器狀態(tài)正常；

• 進(jìn)行波長與光程自檢，系統(tǒng)自動(dòng)完成光學(xué)校準(zhǔn)。

2. 空白校正

• 在每個(gè)通道加1–2 μL緩沖液；

• 關(guān)閉光纖臂，點(diǎn)擊“Blank”進(jìn)行空白測(cè)定；

• 軟件自動(dòng)保存空白值，作為后續(xù)樣品檢測(cè)的基線。

3. 樣品加載

• 在檢測(cè)平臺(tái)中心滴加樣品；

• 確保液滴覆蓋光纖接觸點(diǎn)，避免氣泡；

• 關(guān)閉光纖臂，等待光路穩(wěn)定。

4. 樣品測(cè)定

• 點(diǎn)擊“Measure”開始檢測(cè)；

• 軟件實(shí)時(shí)顯示吸光度譜圖及濃度結(jié)果；

• 可設(shè)置重復(fù)測(cè)量，提升數(shù)據(jù)可靠性。

5. 通道切換與批量檢測(cè)

• NanoDrop Eight支持自動(dòng)切換通道；

• 可一次性加載8個(gè)樣品并同時(shí)檢測(cè)；

• 軟件可批量生成報(bào)告。

五、數(shù)據(jù)分析與結(jié)果輸出

1. 吸光度與濃度計(jì)算

• DNA濃度通過260 nm吸光度計(jì)算；

• 蛋白質(zhì)濃度通過280 nm吸光度或特定方法（BCA、Bradford）；

• 軟件自動(dòng)完成濃度換算。

2. 純度判斷

• 核酸純度：260/280 比值應(yīng)在1.8–2.0之間；

• 蛋白質(zhì)純度：260/280 比值一般約為0.6；

• 額外比值（260/230）用于判定有機(jī)溶劑或鹽離子污染。

3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量分析

• 可建立標(biāo)準(zhǔn)品濃度曲線；

• 自動(dòng)擬合并輸出R2值，保證定量準(zhǔn)確性。

4. 數(shù)據(jù)存儲(chǔ)與導(dǎo)出

• 支持Excel、PDF、CSV等格式導(dǎo)出；

• 可直接上傳至實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)庫；

• 結(jié)果帶有時(shí)間戳，方便追溯。

六、不同應(yīng)用場景的測(cè)試流程

1. DNA/RNA檢測(cè)

• 空白對(duì)照：使用TE緩沖液；

• 測(cè)定波長：260 nm；

• 輸出結(jié)果：濃度（ng/μL）、純度比值。

2. 蛋白質(zhì)檢測(cè)

• 空白對(duì)照：PBS或樣品緩沖液；

• 測(cè)定波長：280 nm或顯色法特定波長；

• 輸出結(jié)果：濃度（mg/mL）、線性擬合曲線。

3. 多通道高通量檢測(cè)

• 一次加載8個(gè)樣品；

• 軟件批量生成檢測(cè)報(bào)告；

• 適用于基因測(cè)序前建庫檢測(cè)或臨床批量樣品分析。

七、提高測(cè)試精度的操作要點(diǎn)

1. 避免交叉污染：每次檢測(cè)后用無核酸酶水清潔平臺(tái)；

2. 控制樣品體積：過量或不足均會(huì)影響結(jié)果；

3. 重復(fù)檢測(cè)：關(guān)鍵樣品建議檢測(cè)3次，取平均值；

4. 定期校準(zhǔn)：使用標(biāo)準(zhǔn)核酸或蛋白溶液進(jìn)行性能驗(yàn)證；

5. 記錄實(shí)驗(yàn)條件：溫度、緩沖液成分應(yīng)如實(shí)記錄。

八、維護(hù)與常見問題

1. 平臺(tái)殘留問題

• 現(xiàn)象：樣品殘留導(dǎo)致后續(xù)檢測(cè)值偏高；

• 解決：用無塵紙和乙醇清潔，必要時(shí)多次沖洗。

2. 光程異常

• 現(xiàn)象：濃度超出范圍或結(jié)果不穩(wěn)定；

• 解決：檢查光纖臂，確認(rèn)光程校準(zhǔn)是否正常。

3. 氣泡干擾

• 現(xiàn)象：譜圖出現(xiàn)異常波動(dòng)；

• 解決：重新加樣，避免用力過大造成氣泡。

4. 數(shù)據(jù)保存丟失

• 現(xiàn)象：未能找到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)；

• 解決：確認(rèn)保存路徑，建議開啟自動(dòng)保存功能。

九、與傳統(tǒng)檢測(cè)方法對(duì)比

從表中可以看出，NanoDrop Eight不僅提高了測(cè)試效率，還在樣品消耗和結(jié)果精度方面顯著優(yōu)于傳統(tǒng)方法。

十、結(jié)論

賽默飛NanoDrop Eight分光光度計(jì)以其微量檢測(cè)、八通道并行、自動(dòng)光程調(diào)節(jié)和高靈敏度探測(cè)的優(yōu)勢(shì)，在液體樣品檢測(cè)中展現(xiàn)了高效、精準(zhǔn)和穩(wěn)定的性能。通過科學(xué)規(guī)范的測(cè)試流程，科研人員能夠在最小樣品消耗條件下獲得可靠數(shù)據(jù)，適用于核酸、蛋白質(zhì)、藥物及臨床樣品等多種應(yīng)用場景。

規(guī)范化的測(cè)試流程不僅提高了實(shí)驗(yàn)精度與重復(fù)性，還使NanoDrop Eight成為實(shí)驗(yàn)室高通量檢測(cè)的重要工具。掌握并優(yōu)化測(cè)試流程，將進(jìn)一步釋放該儀器的潛能，為分子生物學(xué)和生命科學(xué)研究提供堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)支持。