賽默飛分光光度計 NanoDrop Eight 操作培訓(xùn)

一、培訓(xùn)目標

NanoDrop Eight 是賽默飛世爾推出的新一代多通道超微量紫外-可見分光光度計。通過本次操作培訓(xùn)，參訓(xùn)人員將全面掌握以下技能：

1. 了解 NanoDrop Eight 的基本結(jié)構(gòu)與工作原理。

2. 掌握開機、校準、樣品加載、數(shù)據(jù)采集和導(dǎo)出的完整流程。

3. 學會分析核酸、蛋白質(zhì)及其他樣品的檢測結(jié)果。

4. 解決常見操作問題，掌握日常維護要點。

5. 將理論與實際結(jié)合，能夠獨立完成樣品檢測并解釋實驗結(jié)果。

二、設(shè)備概述

1. 設(shè)計特點

• 八通道檢測：一次可檢測 8 個樣品，大幅提升效率。

• 超微量需求：每個樣品僅需 1–2 μL。

• 無比色皿設(shè)計：避免耗材浪費，操作簡便。

• 智能軟件系統(tǒng)：支持批量數(shù)據(jù)處理、報告生成和多用戶管理。

2. 主要組成

• 光學臂與檢測平臺：光源位于上臂，檢測窗口位于下平臺。

• 多通道檢測陣列：八個獨立測量孔。

• 觸控界面：用于選擇檢測模式和操作指令。

• 接口配置：USB、網(wǎng)絡(luò)接口，用于數(shù)據(jù)傳輸和軟件更新。

三、基礎(chǔ)原理

NanoDrop Eight 基于紫外-可見分光光度法：

• 光源發(fā)射特定波長的光照射樣品。

• 樣品中的分子會在特定波長吸收光。

• 探測器接收透過光或反射光信號，轉(zhuǎn)換為電信號。

• 系統(tǒng)根據(jù) Lambert-Beer 定律計算吸光度與濃度：
  $A=\epsilon ?c?l$
  其中 A 為吸光度，ε 為摩爾吸光系數(shù)，c 為濃度，l 為光程。
  由于 NanoDrop Eight 采用固定光程技術(shù)，無需比色皿即可獲得高精度數(shù)據(jù)。

四、操作步驟

1. 開機與預(yù)熱

• 連接電源，打開開關(guān)。

• 等待光源穩(wěn)定，約 2–3 分鐘。

2. 校準

• 選擇“Blank”功能。

• 滴加 1–2 μL 空白緩沖液，關(guān)閉上臂進行基線校正。

3. 樣品加載

• 使用移液器取 1–2 μL 樣品滴加至檢測平臺窗口。

• 避免產(chǎn)生氣泡，保證液滴完全覆蓋光路。

• 關(guān)閉上臂，準備測定。

4. 選擇檢測模式

• 核酸模式：260 nm 吸光度，檢測 DNA、RNA。

• 蛋白模式：280 nm 吸光度，檢測蛋白濃度。

• 全波長掃描：190–850 nm，獲取光譜曲線。

• 熒光標記檢測：450–650 nm，分析染料標記分子。

5. 數(shù)據(jù)采集與展示

• 點擊“Start”，設(shè)備自動完成掃描。

• 屏幕顯示濃度、吸光度、純度比值以及完整光譜。

6. 結(jié)果保存與導(dǎo)出

• 保存結(jié)果至本地存儲。

• 通過 USB 或網(wǎng)絡(luò)接口導(dǎo)出，支持表格和圖形化報告。

五、數(shù)據(jù)解讀

1. 核酸結(jié)果

• DNA 濃度：2–27,500 ng/μL。

• RNA 濃度：2–27,500 ng/μL。

• 純度比值：A260/A280 ≈ 1.8（DNA）、≈ 2.0（RNA）為合格。

2. 蛋白質(zhì)結(jié)果

• 濃度范圍：0.06–370 mg/mL。

• 純度比值：A260/A280 ≈ 0.6–0.7。

3. 雜質(zhì)檢測

• A260/A230：若顯著低于 2.0，提示有鹽類或有機物污染。

4. 光譜曲線

• 判斷峰形是否符合樣品特征。

• 分析是否存在背景干擾或異常吸收。

六、常見問題與解決方案

1. 樣品不穩(wěn)定

• 原因：樣品滴加不均勻或體積不足。

• 解決：確保移液器準確取樣，液滴完整覆蓋窗口。

2. 純度比值異常

• 原因：溶液中含有蛋白或酚類污染。

• 解決：重新純化樣品或更換提取方法。

3. 信號偏低

• 原因：光學窗口污染或殘留物影響。

• 解決：用去離子水或 70% 乙醇清潔檢測平臺。

4. 重復(fù)性差

• 原因：樣品濃度過高導(dǎo)致飽和。

• 解決：適當稀釋后重新檢測。

七、日常維護

1. 清潔
   每次測量后用無絨紙擦拭窗口，必要時用乙醇清洗。

2. 光源保護
   不使用時關(guān)閉設(shè)備，避免長時間待機。

3. 定期校準
   建議每周進行一次性能驗證。

4. 軟件更新
   定期檢查系統(tǒng)升級，保證數(shù)據(jù)處理功能完善。

八、案例演示

1. RNA 質(zhì)控

• 滴加 2 μL RNA 溶液，檢測結(jié)果 A260/A280 = 2.01。

• 數(shù)據(jù)表明樣品純度良好，可進入測序?qū)嶒灐?/p>

2. 蛋白定量

• 檢測 BSA 溶液，結(jié)果顯示 2.5 mg/mL。

• 與標準曲線對比，誤差小于 2%。

3. 批量核酸檢測

• 同時檢測 8 個 DNA 樣品。

• 軟件自動生成對比報告，節(jié)省大量時間。

4. 熒光標記實驗

• 樣品在 550 nm 出現(xiàn)峰值。

• 結(jié)果證明標記成功，可進行后續(xù)實驗。

九、培訓(xùn)考核要點

1. 能否獨立完成樣品加載與檢測。

2. 是否正確解讀濃度與純度結(jié)果。

3. 是否能識別常見錯誤并提出解決措施。

4. 能否在實驗后正確清潔與關(guān)閉設(shè)備。

十、總結(jié)提升

通過培訓(xùn)，學員應(yīng)能熟練操作 NanoDrop Eight，理解其檢測原理，掌握核酸與蛋白質(zhì)的常規(guī)檢測方法，并具備分析和解決問題的能力。NanoDrop Eight 的優(yōu)勢在于：

• 檢測范圍廣，涵蓋核酸、蛋白質(zhì)及其他分子。

• 高通量能力強，可一次性完成 8 個樣品。

• 樣品需求量極少，適合寶貴實驗材料。

• 操作簡便，數(shù)據(jù)直觀，報告規(guī)范。

在科研、教學、臨床和工業(yè)應(yīng)用中，NanoDrop Eight 已成為實驗室常用的高效檢測工具。