賽默飛分光光度計(jì)NanoDrop Eight實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)

一、前言

NanoDrop Eight是賽默飛公司推出的多通道微量分光光度計(jì)，廣泛應(yīng)用于核酸、蛋白及細(xì)胞溶液等生物分子檢測(cè)。其最大的優(yōu)勢(shì)在于高通量測(cè)定，能夠同時(shí)檢測(cè)多達(dá)8個(gè)樣品，且僅需1~2 μL即可完成定量與純度分析。經(jīng)過(guò)大量實(shí)際使用，研究人員在樣品準(zhǔn)備、檢測(cè)操作、數(shù)據(jù)分析和日常維護(hù)方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，這些經(jīng)驗(yàn)有助于避免常見(jiàn)錯(cuò)誤，提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和效率。

二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備的經(jīng)驗(yàn)

1. 儀器環(huán)境準(zhǔn)備

• 將NanoDrop Eight放置在穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，遠(yuǎn)離震動(dòng)源與強(qiáng)電磁干擾設(shè)備。

• 實(shí)驗(yàn)室溫度保持在20~25℃之間，濕度控制在60%以下，以確保光學(xué)元件不受潮。

• 開(kāi)機(jī)預(yù)熱3~5分鐘后再進(jìn)行檢測(cè)，使光源達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。

2. 樣品準(zhǔn)備經(jīng)驗(yàn)

• 核酸樣品：溶解于無(wú)RNA酶、無(wú)DNA酶的緩沖液或水中，避免使用高鹽緩沖液。

• 蛋白樣品：使用PBS或Tris緩沖液，避免高濃度去污劑或有機(jī)溶劑。

• 細(xì)胞或菌液樣品：需均勻混勻，避免沉淀。

• 建議樣品濃度控制在儀器檢測(cè)范圍內(nèi)，避免因濃度過(guò)高導(dǎo)致光程飽和。

3. 檢測(cè)平臺(tái)準(zhǔn)備

• 每次檢測(cè)前先用無(wú)核酸酶水清洗測(cè)量平臺(tái)，并用無(wú)絨紙擦干。

• 對(duì)不同類型樣品，使用相應(yīng)的空白對(duì)照進(jìn)行校正。

三、實(shí)驗(yàn)檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)

1. 上樣操作

• 使用移液器準(zhǔn)確吸取1.5~2 μL樣品，滴在檢測(cè)平臺(tái)中央。

• 避免樣品形成氣泡，氣泡會(huì)導(dǎo)致光散射和曲線畸變。

• 樣品覆蓋檢測(cè)窗口后，應(yīng)立即關(guān)閉上蓋，避免蒸發(fā)影響測(cè)定。

2. 測(cè)量模式選擇

• 核酸檢測(cè)模式：以260 nm為主波長(zhǎng)，同時(shí)記錄260/280和260/230比值。

• 蛋白檢測(cè)模式：可直接測(cè)280 nm吸收，或選擇顯色法（BCA、Bradford等）。

• 細(xì)菌密度測(cè)定：在600 nm檢測(cè)，繪制生長(zhǎng)曲線。

• 全光譜掃描：適用于未知樣品或需評(píng)估純度的情況，覆蓋190~850 nm。

3. 多通道測(cè)量經(jīng)驗(yàn)

• NanoDrop Eight支持8通道同步檢測(cè)，適合處理大量樣品。

• 實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)表明，通道之間的差異極小，但為避免誤差，應(yīng)統(tǒng)一樣品體積和上樣方式。