賽默飛分光光度計NanoDrop Eight常見問題

一、前言

NanoDrop Eight是賽默飛在分子生物學(xué)與生命科學(xué)領(lǐng)域推出的一款多通道微量分光光度計。該儀器以少量樣品需求、高通量檢測和快速數(shù)據(jù)輸出為特點，廣泛應(yīng)用于核酸、蛋白質(zhì)及其他生物分子的濃度與純度測定。在日常實驗中，科研人員經(jīng)常會遇到一些操作和使用上的問題，如果未能及時解決，不僅會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，還可能損害樣品甚至儀器。

本文將系統(tǒng)總結(jié)NanoDrop Eight在使用過程中可能出現(xiàn)的常見問題，并從問題表現(xiàn)、原因分析及解決方法三個方面逐一解析，幫助用戶更好地理解和應(yīng)用該儀器。

二、樣品相關(guān)問題

1. 樣品濃度不在線性范圍

表現(xiàn)：檢測結(jié)果偏低或超出范圍；譜圖異常平坦或吸光度飽和。
原因：NanoDrop Eight的檢測線性范圍為2–15,000 ng/μL（DNA）。濃度過高時，吸光度超出線性范圍；濃度過低時，信噪比下降。
解決方法：

• 高濃度樣品應(yīng)進(jìn)行稀釋后再測定；

• 低濃度樣品可多次測量并取平均值，必要時使用熒光法替代。

2. 樣品出現(xiàn)氣泡

表現(xiàn)：譜圖出現(xiàn)不規(guī)則波動，濃度結(jié)果差異大。
原因：加樣時液滴內(nèi)夾帶氣泡，導(dǎo)致光路散射。
解決方法：

• 緩慢滴加，避免快速操作；

• 輕輕觸碰移液器吸頭末端，確保液滴平穩(wěn)釋放。

3. 蛋白質(zhì)樣品結(jié)果偏差大

表現(xiàn)：不同重復(fù)間差異顯著。
原因：蛋白質(zhì)樣品粘度高，溶液不均一；部分蛋白質(zhì)在平臺表面易形成薄膜殘留。
解決方法：

• 使用PBS或去離子水充分稀釋；

• 每次檢測后立即清潔平臺，避免殘留。

4. RNA樣品260/230比值異常

表現(xiàn)：260/280比值正常，但260/230比值偏低。
原因：樣品中存在有機(jī)溶劑、鹽離子或多糖殘留。
解決方法：

• 重新提取或純化RNA；

• 采用硅膠柱純化方法去除雜質(zhì)。

三、操作相關(guān)問題

1. 樣品殘留與交叉污染

表現(xiàn)：后續(xù)樣品結(jié)果偏高或背景異常。
原因：平臺未清潔干凈，前一個樣品殘留干擾結(jié)果。
解決方法：

• 每次測量后立即用無核酸酶水或70%乙醇擦拭平臺；

• 使用無塵紙輕輕擦拭，避免劃傷檢測點。

2. 樣品體積不足

表現(xiàn)：檢測失敗或提示光程未建立。
原因：NanoDrop Eight檢測需要形成完整液體橋，體積不足無法覆蓋光纖臂。
解決方法：

• 核酸和蛋白質(zhì)檢測至少保證1 μL；

• 高粘度樣品可適當(dāng)增加至2 μL。

3. 樣品加載位置偏移

表現(xiàn)：重復(fù)性差或結(jié)果波動大。
原因：樣品未滴加在平臺中心，光束未完全穿過樣品。
解決方法：

• 將液滴準(zhǔn)確置于檢測點中央；

• 使用移液器時保持垂直。

四、儀器相關(guān)問題

1. 光程異常

表現(xiàn)：結(jié)果明顯偏離實際濃度；儀器提示光程錯誤。
原因：光纖臂未完全閉合或光學(xué)系統(tǒng)校準(zhǔn)異常。
解決方法：

• 檢查光纖臂是否有異物阻擋；

• 運(yùn)行自檢程序校準(zhǔn)光程。

2. 光源衰減或不穩(wěn)定

表現(xiàn)：譜圖背景噪聲增多，重復(fù)性下降。
原因：光源老化，輸出能量不足。
解決方法：

• 檢查使用年限，必要時更換光源模塊；

• 避免頻繁開關(guān)機(jī)，延長光源壽命。

3. 檢測平臺刮痕

表現(xiàn)：譜圖不規(guī)則，部分通道信號異常。
原因：清潔時用力過大或使用硬質(zhì)工具。
解決方法：

• 更換受損平臺；

• 平時僅使用專用無塵紙和柔軟布清潔。

4. 軟件連接問題

表現(xiàn)：電腦無法識別設(shè)備或檢測中斷。
原因：USB接口松動、驅(qū)動程序未更新。
解決方法：

• 檢查接口連接，重新插拔；

• 更新驅(qū)動程序和NanoDrop Eight軟件。

五、數(shù)據(jù)與結(jié)果相關(guān)問題

1. 測試結(jié)果不穩(wěn)定

表現(xiàn)：同一樣品多次測量差異大。
原因：樣品溶液不均勻、平臺未清潔、環(huán)境溫度波動。
解決方法：

• 樣品使用前輕輕混勻；

• 檢測平臺保持清潔；

• 在恒溫實驗環(huán)境中操作。

2. 260/280比值偏離正常范圍

表現(xiàn)：DNA結(jié)果低于1.7或高于2.0。
原因：蛋白質(zhì)、酚類或緩沖液雜質(zhì)干擾。
解決方法：

• 重新純化樣品；

• 確認(rèn)空白對照選擇正確。

3. 測試報告導(dǎo)出失敗

表現(xiàn)：文件無法保存或丟失。
原因：路徑錯誤或軟件沖突。
解決方法：

• 檢查保存路徑權(quán)限；

• 建議使用本地硬盤而非移動存儲。

六、維護(hù)與預(yù)防措施

1. 日常維護(hù)

• 每次實驗后立即清潔檢測平臺；

• 定期運(yùn)行自檢和校準(zhǔn)；

• 避免長時間不使用，建議定期開機(jī)自檢。

2. 樣品前處理規(guī)范

• 使用無核酸酶水稀釋；

• 過濾或離心去除沉淀和雜質(zhì)；

• 避免高鹽或有機(jī)溶劑殘留。

3. 環(huán)境要求

• 保持室溫20–25℃；

• 避免直射陽光和強(qiáng)電磁干擾；

• 儀器放置在穩(wěn)定平臺，減少震動影響。

七、典型問題與案例分析

案例一：DNA濃度檢測偏高

問題：樣品濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍。
原因：未進(jìn)行稀釋，導(dǎo)致吸光度飽和。
解決：將樣品稀釋10倍，結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)一致。

案例二：RNA 260/230比值過低

問題：結(jié)果僅為1.2。
原因：RNA中殘留鹽離子。
解決：采用柱純化，重復(fù)測定后比值恢復(fù)至2.0。

案例三：通道差異大

問題：8個通道檢測相同樣品，個別通道濃度偏差大。
原因：檢測平臺局部有劃痕。
解決：更換檢測平臺，結(jié)果恢復(fù)一致。

八、與用戶常見疑問

1. 最小樣品體積是多少？
   通常為1 μL，高粘度樣品可用2 μL。

2. 能否檢測混合樣品？
   可檢測，但結(jié)果為整體吸收特征，不適用于組分分離分析。

3. 如何保證多通道一致性？
   保持平臺清潔，定期運(yùn)行通道一致性測試。

4. 為什么同一樣品結(jié)果與熒光定量差異大？
   分光光度法測總量，熒光法偏重功能性或雙鏈DNA，原理差異導(dǎo)致結(jié)果不同。

九、總結(jié)

NanoDrop Eight分光光度計在微量核酸與蛋白檢測中表現(xiàn)出高靈敏度和高通量的優(yōu)勢，但在日常使用中仍可能遇到樣品、操作、儀器和數(shù)據(jù)等方面的問題。通過合理的樣品處理、規(guī)范化的操作步驟、定期維護(hù)與校準(zhǔn)，可以顯著減少問題發(fā)生，提高實驗精度與結(jié)果可靠性。

對于科研人員而言，理解并掌握這些常見問題及其解決方案，不僅能夠提升實驗效率，還能延長儀器使用壽命，為分子生物學(xué)和生命科學(xué)研究提供更穩(wěn)定的數(shù)據(jù)支持。