賽默飛分光光度計(jì)BioMate 160實(shí)驗(yàn)設(shè)置參數(shù)詳解

一、設(shè)備概述

賽默飛BioMate 160分光光度計(jì)是一款實(shí)驗(yàn)室常用的紫外-可見分光光度計(jì)，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、分析化學(xué)、制藥和食品檢測(cè)等領(lǐng)域。該儀器采用先進(jìn)的光學(xué)系統(tǒng)與高靈敏度檢測(cè)器，能夠在190~1100 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)量。其核心特點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)便、測(cè)量重復(fù)性高、軟件功能完善，尤其適合需要進(jìn)行多參數(shù)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室。

分光光度計(jì)的核心任務(wù)是通過測(cè)定樣品對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收程度來推斷其濃度或結(jié)構(gòu)特征。BioMate 160配備的光源為氘燈（覆蓋紫外區(qū)）和鎢燈（覆蓋可見區(qū)），通過自動(dòng)切換實(shí)現(xiàn)全波段掃描。其配置的軟件允許使用者快速設(shè)定實(shí)驗(yàn)參數(shù)，完成定量、定性或動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。

二、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備與校準(zhǔn)

1. 電源與預(yù)熱

在實(shí)驗(yàn)前，確保設(shè)備接通穩(wěn)定電源。開機(jī)后需預(yù)熱15-20分鐘，使光源達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，避免因燈絲電流波動(dòng)導(dǎo)致的基線漂移。

2. 比色皿檢查

BioMate 160支持1 cm、5 cm和10 cm光程比色皿。常規(guī)實(shí)驗(yàn)中多采用1 cm標(biāo)準(zhǔn)石英比色皿，需提前檢查其是否干凈透明，無劃痕與氣泡。

3. 校正與零點(diǎn)調(diào)整

在正式實(shí)驗(yàn)前，需以空氣或純?nèi)軇榭瞻讌⒈冗M(jìn)行零點(diǎn)校正。校正步驟包括：

• 選擇實(shí)驗(yàn)所需波長(zhǎng)

• 插入裝有溶劑的比色皿作為參比

• 進(jìn)行自動(dòng)調(diào)零，確保透射率為100%或吸光度為0

三、關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置

BioMate 160的參數(shù)設(shè)置通常通過觸控面板或配套軟件完成，主要包括以下幾類：

1. 波長(zhǎng)設(shè)定

• 固定波長(zhǎng)模式：輸入單一波長(zhǎng)（如260 nm或280 nm）進(jìn)行核酸或蛋白濃度測(cè)定。

• 掃描模式：設(shè)定起始與終止波長(zhǎng)（如200~400 nm），以及掃描間隔（1 nm、2 nm等），獲取完整光譜圖。

• 多波長(zhǎng)模式：一次設(shè)定多個(gè)波長(zhǎng)（如260 nm和280 nm），常用于核酸純度判定。

2. 測(cè)量模式

• 吸光度（Absorbance）：最常用模式，結(jié)果以A值顯示。

• 透過率（%T）：適合檢測(cè)透明度或透光率。

• 濃度（Concentration）：可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法或輸入摩爾消光系數(shù)進(jìn)行定量。

3. 光譜帶寬

BioMate 160提供1 nm或2 nm帶寬選擇。1 nm適用于精細(xì)結(jié)構(gòu)研究，2 nm適合常規(guī)檢測(cè)，可提升信噪比。

4. 采樣速度

掃描速率可設(shè)為慢速、中速、快速。慢速掃描可獲得更高分辨率，適合精確研究；快速掃描適合高通量檢測(cè)。

5. 光程補(bǔ)償

在使用非標(biāo)準(zhǔn)比色皿時(shí)，可以在參數(shù)中輸入光程，儀器會(huì)自動(dòng)進(jìn)行吸光度修正。

四、常用實(shí)驗(yàn)設(shè)置舉例

1. 核酸濃度與純度檢測(cè)

• 波長(zhǎng)設(shè)置：260 nm、280 nm、230 nm

• 測(cè)量模式：吸光度模式，多波長(zhǎng)測(cè)定

• 參數(shù)說明：A260用于核酸濃度計(jì)算；A260/A280比值用于判定蛋白污染；A260/A230比值用于檢測(cè)鹽或有機(jī)物殘留。

2. 蛋白濃度檢測(cè)（Bradford或BCA法）

• 波長(zhǎng)設(shè)置：595 nm（Bradford）、562 nm（BCA）

• 測(cè)量模式：濃度模式，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算未知樣品濃度

• 注意事項(xiàng)：需提前制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，并保證顯色反應(yīng)充分完成。

3. 酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定

• 波長(zhǎng)設(shè)置：根據(jù)底物或產(chǎn)物的最大吸收波長(zhǎng)設(shè)定，如340 nm檢測(cè)NADH

• 測(cè)量模式：時(shí)間掃描模式，記錄一定時(shí)間內(nèi)吸光度變化

• 參數(shù)設(shè)置：采樣間隔可設(shè)定為5~10秒，測(cè)量總時(shí)長(zhǎng)可達(dá)數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)。

4. 全波段掃描

• 起始波長(zhǎng)：200 nm

• 終止波長(zhǎng)：800 nm

• 掃描間隔：1 nm

• 模式：吸光度模式

• 應(yīng)用：用于分析化合物的吸收峰位置，進(jìn)行結(jié)構(gòu)或純度判定。

五、數(shù)據(jù)采集與結(jié)果處理

BioMate 160的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可通過多種方式輸出：

1. 儀器顯示屏直接讀取：適合快速實(shí)驗(yàn)。

2. 內(nèi)置存儲(chǔ)或外接U盤導(dǎo)出：常用于保存大批量數(shù)據(jù)。

3. 配套軟件數(shù)據(jù)分析：可實(shí)現(xiàn)峰值分析、基線校正、曲線擬合、動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算等功能。

數(shù)據(jù)處理時(shí)需注意：

• 多次測(cè)定平均值可提高結(jié)果可靠性

• 需要扣除空白樣本背景值

• 建議繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并驗(yàn)證線性范圍

六、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1. 比色皿放置方向統(tǒng)一：避免因光程差異導(dǎo)致結(jié)果偏差。

2. 樣品體積充足：液面需高于光路高度，確保光束完全穿過樣品。

3. 避免氣泡干擾：操作前輕輕敲擊比色皿，排除氣泡。

4. 實(shí)驗(yàn)環(huán)境穩(wěn)定：避免強(qiáng)光直射或溫度劇烈波動(dòng)，減少基線漂移。

5. 定期維護(hù)：光源壽命有限，需定期檢查并更換氘燈或鎢燈；比色皿應(yīng)及時(shí)清洗，避免殘留物沉積。

七、實(shí)驗(yàn)優(yōu)化與高級(jí)設(shè)置

1. 靈敏度優(yōu)化
   在低濃度樣品檢測(cè)時(shí)，應(yīng)選擇窄帶寬（1 nm）和慢速掃描，以減少噪音并提升分辨率。

2. 線性范圍驗(yàn)證
   在建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，需驗(yàn)證不同濃度區(qū)間的線性關(guān)系，確保定量結(jié)果準(zhǔn)確。

3. 溫控配合
   對(duì)于溫度敏感的反應(yīng)體系，可配合外部水浴或溫控模塊使用，確保酶動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)的可靠性。

4. 自動(dòng)化擴(kuò)展
   BioMate 160可與部分自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)對(duì)接，實(shí)現(xiàn)批量樣品的快速檢測(cè)，適合高通量實(shí)驗(yàn)。

八、總結(jié)

賽默飛分光光度計(jì)BioMate 160憑借其穩(wěn)定的光學(xué)性能、靈活的參數(shù)設(shè)置和完善的數(shù)據(jù)處理功能，成為實(shí)驗(yàn)室分析中的重要工具。實(shí)驗(yàn)設(shè)置參數(shù)涵蓋波長(zhǎng)選擇、測(cè)量模式、光譜帶寬、掃描速度、光程修正等多個(gè)方面，不同的實(shí)驗(yàn)類型對(duì)應(yīng)不同的參數(shù)設(shè)定。正確的參數(shù)選擇與優(yōu)化，能夠顯著提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與重復(fù)性。

通過科學(xué)的設(shè)置與規(guī)范化的操作，BioMate 160不僅能完成常規(guī)的核酸與蛋白定量分析，還能應(yīng)用于酶動(dòng)力學(xué)、藥物研發(fā)、材料檢測(cè)等更廣泛的研究領(lǐng)域，為科研人員提供可靠的數(shù)據(jù)支持。