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一、前言

熒光定量 PCR（Real-Time Quantitative PCR, qPCR）已經(jīng)從 20 世紀(jì)末的實(shí)驗(yàn)室新技術(shù)，發(fā)展為生命科學(xué)和臨床檢測的常規(guī)手段。它將 PCR 擴(kuò)增與熒光信號檢測同步進(jìn)行，能夠在每一循環(huán)實(shí)時(shí)監(jiān)測反應(yīng)過程，最終以定量方式輸出結(jié)果。

羅氏（Roche）的 LightCycler 系列 qPCR 儀在全球擁有廣泛的用戶基礎(chǔ)，以精確的溫控、優(yōu)良的光學(xué)系統(tǒng)和直觀的操作軟件著稱。對于預(yù)算有限的實(shí)驗(yàn)室，二手羅氏 qPCR 儀不僅能顯著降低購置成本，還能在性能上滿足絕大多數(shù)科研與檢測需求。特別是 LightCycler 480 II 與 LightCycler 96，二者覆蓋了從高通量到中等通量的多種應(yīng)用場景，是二手市場的熱門型號。

二、技術(shù)原理

羅氏熒光定量 PCR 儀的檢測核心，是將熒光信號與核酸擴(kuò)增過程實(shí)時(shí)耦合：

1. 擴(kuò)增
   樣品中的目標(biāo) DNA 或 cDNA 經(jīng)由 PCR 反應(yīng)，在熱循環(huán)系統(tǒng)的溫控下按設(shè)定的溫度曲線擴(kuò)增。

2. 熒光信號采集
   熒光染料或探針在與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合或被切割時(shí)釋放信號，光學(xué)檢測模塊在每一循環(huán)結(jié)束時(shí)進(jìn)行激發(fā)與檢測。

3. 曲線生成與分析
   軟件將信號強(qiáng)度與循環(huán)數(shù)對應(yīng)繪制擴(kuò)增曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法或 ΔΔCt 方法進(jìn)行絕對或相對定量分析。

檢測方式可分為：

• 染料法（如 SYBR Green）：經(jīng)濟(jì)、易用，適合基因表達(dá)分析。

• 探針法（如 TaqMan、FRET 探針）：特異性高，適合多重檢測與臨床診斷。

三、主要型號與特性

1. LightCycler 480 II

• 貨號：05015278001

• 通量：可使用 96 孔或 384 孔反應(yīng)板，滿足大規(guī)模樣本處理需求。

• 溫控：升降溫速度快、均一性高，孔間差異極小，確保大通量實(shí)驗(yàn)中的一致性。

• 光學(xué)系統(tǒng)：支持多波長檢測，可進(jìn)行多重?zé)晒鈱?shí)驗(yàn)；濾光系統(tǒng)切換迅速，減少通道干擾。

• 應(yīng)用定位：大型科研項(xiàng)目、臨床分子診斷、基因表達(dá)譜研究、高通量病原體篩查。

• 優(yōu)勢：一次性處理樣本多，適合中心實(shí)驗(yàn)室或需要批量檢測的單位。

2. LightCycler 96

• 貨號：05815916001

• 通量：固定 96 孔平臺，兼容標(biāo)準(zhǔn) PCR 板或 8 聯(lián)管，靈活適配小批量實(shí)驗(yàn)。

• 用戶界面：彩色觸屏+直觀圖形化菜單，新用戶也能快速掌握操作。

• 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：體積小，桌面放置即可運(yùn)行，維護(hù)簡便。

• 應(yīng)用定位：中小型科研團(tuán)隊(duì)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)室、常規(guī)分子檢測。

• 優(yōu)勢：成本低、上手快、實(shí)驗(yàn)室占地少。

四、二手采購的意義

二手羅氏 qPCR 儀對于預(yù)算有限但追求性能的實(shí)驗(yàn)室來說，有以下價(jià)值：

1. 顯著降低成本
   新機(jī)價(jià)格通常在幾十萬元人民幣，而二手設(shè)備僅需其三分之一到一半的預(yù)算。

2. 性能與耐用性
   羅氏設(shè)備壽命長、核心部件耐用，只要維護(hù)得當(dāng)，二手機(jī)依然能保持穩(wěn)定表現(xiàn)。

3. 備件與耗材易獲取
   由于用戶基數(shù)大，耗材供應(yīng)和第三方維修渠道豐富，維護(hù)成本低。

4. 部署周期短
   二手設(shè)備通?，F(xiàn)貨供應(yīng)，安裝調(diào)試后即可投入使用，無需漫長的交貨等待。

五、核心性能亮點(diǎn)

1. 溫控精度
   采用高精度半導(dǎo)體熱循環(huán)技術(shù)，溫度偏差可控制在 ±0.25°C 以內(nèi)，保證 Ct 值穩(wěn)定。

2. 多重檢測能力
   光學(xué)模塊可支持多達(dá) 6 種熒光通道，實(shí)現(xiàn)一管多靶標(biāo)檢測，顯著提高效率。

3. 信號靈敏度
   檢測下限可低至單拷貝水平，適合低濃度樣本檢測。

4. 軟件分析功能
   從擴(kuò)增曲線到熔解曲線，從相對定量到 SNP 分型，分析模塊完整且易用。

5. 耐用結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)
   光學(xué)組件與熱循環(huán)模塊密封良好，減少灰塵和濕氣影響，延長使用壽命。

六、應(yīng)用場景

1. 生命科學(xué)研究

• 基因表達(dá)定量分析

• 轉(zhuǎn)錄組驗(yàn)證

• 拷貝數(shù)變異研究

2. 臨床與公共衛(wèi)生

• 病原體載量檢測（如流感病毒、SARS-CoV-2）

• 遺傳病基因突變篩查

• 腫瘤分子標(biāo)志物分析

3. 農(nóng)業(yè)與食品安全

• 轉(zhuǎn)基因成分檢測

• 食源性致病菌檢測

• 動(dòng)植物疫病監(jiān)測

4. 環(huán)境監(jiān)測

• 水質(zhì)微生物污染監(jiān)測

• 病原體環(huán)境溯源調(diào)查

七、使用與維護(hù)要點(diǎn)

1. 開機(jī)前檢查
   確保樣品架、光學(xué)模塊干凈無塵，防止信號干擾。

2. 耗材匹配
   選用廠家推薦或兼容性驗(yàn)證過的反應(yīng)板、管、封膜，防止蒸發(fā)或漏液。

3. 定期校準(zhǔn)
   每 6–12 個(gè)月進(jìn)行一次溫控與光學(xué)校準(zhǔn)，確保數(shù)據(jù)精度。

4. 軟件維護(hù)
   保持分析軟件版本更新，以獲取新功能和更好兼容性。

5. 運(yùn)輸與存儲(chǔ)
   搬運(yùn)時(shí)固定光學(xué)和熱循環(huán)模塊，存放在干燥恒溫環(huán)境。

八、結(jié)語

無論是高通量的 LightCycler 480 II，還是靈活易用的 LightCycler 96，二手羅氏熒光定量 PCR 儀都能在合理預(yù)算內(nèi)提供穩(wěn)定可靠的分子檢測能力。前者適合中心實(shí)驗(yàn)室和大規(guī)模篩查項(xiàng)目，后者更適合中小型實(shí)驗(yàn)室的日常檢測與培訓(xùn)應(yīng)用。

在采購時(shí)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)需求、預(yù)算、樣本量與未來擴(kuò)展方向進(jìn)行選擇，再配合到位的驗(yàn)機(jī)與維護(hù)流程，就能在不犧牲性能的前提下，實(shí)現(xiàn)檢測能力與成本控制的雙贏。