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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）作為分子生物學(xué)中最為基礎(chǔ)且廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，極大地推動(dòng)了生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、食品安全、法醫(yī)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域的發(fā)展。熒光定量PCR（Quantitative Real-Time PCR, qPCR）是在傳統(tǒng)PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展而來的，其利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過程，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)核酸的定量分析。伯樂（Bio-Rad）公司作為分子生物學(xué)領(lǐng)域的重要設(shè)備提供商，其推出的CFX系列熒光定量PCR儀因性能穩(wěn)定、靈敏度高、操作便捷等特點(diǎn)，在全球眾多實(shí)驗(yàn)室中得到了廣泛應(yīng)用。
伯樂熒光定量PCR儀采用實(shí)時(shí)熒光信號(hào)檢測(cè)的方式，結(jié)合TaqMan探針或SYBR Green染料，通過每個(gè)循環(huán)中熒光強(qiáng)度的變化來動(dòng)態(tài)反映DNA擴(kuò)增的進(jìn)程。
SYBR Green原理：SYBR Green I 是一種非特異性熒光染料，能嵌入雙鏈DNA（dsDNA）中，嵌入后發(fā)出強(qiáng)烈熒光。PCR反應(yīng)中，產(chǎn)物量越多，熒光信號(hào)越強(qiáng)。
TaqMan探針法：該方法使用含有熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)的寡核苷酸探針。在PCR擴(kuò)增過程中，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針切斷，釋放熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)高特異性檢測(cè)。
CFX系列PCR儀內(nèi)置高靈敏度光學(xué)系統(tǒng)，可在每一循環(huán)結(jié)束時(shí)檢測(cè)熒光變化，從而生成擴(kuò)增曲線，實(shí)現(xiàn)定量分析。
| 參數(shù) | CFX96 Touch | CFX384 Touch |
|---|---|---|
| 樣本通量 | 96孔 | 384孔 |
| 熒光通道數(shù) | 最多5通道 | 最多5通道 |
| 最快升溫速度 | 5°C/s | 4°C/s |
| 最快降溫速度 | 3.5°C/s | 3.5°C/s |
| 溫度均一性 | ±0.2°C | ±0.2°C |
| 靈敏度 | 可檢測(cè)單拷貝 | 可檢測(cè)單拷貝 |
| 操作界面 | 觸摸屏+軟件控制 | 觸摸屏+軟件控制 |
伯樂PCR儀配套使用CFX Maestro軟件，支持多重分析（multiplexing）、標(biāo)準(zhǔn)曲線法、相對(duì)/絕對(duì)定量、熔解曲線分析、基因表達(dá)分析等。
伯樂CFX系列配備Peltier溫控模塊，可實(shí)現(xiàn)快速升降溫、精準(zhǔn)控溫，保證擴(kuò)增效率與重復(fù)性。溫度均一性在±0.2°C以內(nèi)，最大程度減少井間差異。
CFX系統(tǒng)采用獨(dú)立熒光通道，每通道配有專屬LED激發(fā)光源和濾光片組，避免串?dāng)_、提高檢測(cè)精度。靈敏度高，可實(shí)現(xiàn)單分子級(jí)別檢測(cè)。
可支持多達(dá)5種熒光染料（FAM、HEX/VIC、Texas Red、Cy5、Cy5.5等），適合進(jìn)行多重qPCR反應(yīng)，提高數(shù)據(jù)通量和實(shí)驗(yàn)效率。
CFX Maestro軟件功能強(qiáng)大，支持以下功能：
Ct值自動(dòng)計(jì)算與編輯；
標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)繪制；
表達(dá)量相對(duì)/絕對(duì)定量分析；
融解曲線分析判別產(chǎn)物特異性；
熱圖與聚類分析；
21 CFR Part 11合規(guī)選項(xiàng)，滿足臨床應(yīng)用需求。
觸屏操作界面，支持USB、WiFi、LAN連接；
與伯樂的PCR耗材、通用塑料管、高透光密封膜完全兼容；
支持LIMS系統(tǒng)對(duì)接和遠(yuǎn)程數(shù)據(jù)管理。
伯樂熒光定量PCR儀廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)科研與臨床研究，包括但不限于以下幾個(gè)方向：
通過相對(duì)或絕對(duì)定量方法，可定量檢測(cè)mRNA或miRNA的表達(dá)水平，廣泛用于腫瘤學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、植物抗性研究等領(lǐng)域。
使用特異性引物與探針，快速識(shí)別細(xì)菌、病毒、真菌等感染源，如HIV、HPV、SARS-CoV-2等，是臨床微生物檢測(cè)的核心工具。
結(jié)合探針法或HRM（高分辨熔解曲線）技術(shù)，檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性（SNP）或點(diǎn)突變，應(yīng)用于遺傳學(xué)研究與分子診斷。
檢測(cè)轉(zhuǎn)基因作物中特定外源基因（如35S啟動(dòng)子、NOS終止子）是否存在，滿足食品安全檢測(cè)需求。
定量PCR在DNA指紋、親子鑒定、法醫(yī)學(xué)物證分析中具有廣泛應(yīng)用，特別適合微量樣本分析。
在眾多qPCR品牌中（如ABI、Roche、Qiagen、Thermo Fisher），伯樂PCR儀具有如下優(yōu)勢(shì)：
| 指標(biāo) | 伯樂（Bio-Rad） | ABI（Applied Biosystems） | Roche（LightCycler） |
|---|---|---|---|
| 價(jià)格 | 中等偏低 | 中等 | 偏高 |
| 通道串?dāng)_ | 極低 | 存在一定串?dāng)_ | 中等 |
| 操作界面 | 簡(jiǎn)單直觀 | 相對(duì)復(fù)雜 | 中等 |
| 分析軟件 | CFX Maestro強(qiáng)大易用 | 需要額外安裝 | 功能全面但復(fù)雜 |
| 服務(wù)與耗材兼容性 | 極佳 | 中等 | 偏差大 |
在使用伯樂熒光定量PCR儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)，以保證數(shù)據(jù)質(zhì)量和儀器壽命：
樣本制備規(guī)范化：核酸模板應(yīng)純凈、無蛋白、無抑制劑，建議使用A260/A280在1.8~2.0之間的RNA或DNA。
封板質(zhì)量控制：確保每個(gè)孔充分封膜，無氣泡，否則會(huì)導(dǎo)致光信號(hào)干擾或孔間污染。
避免光漂白：染料類熒光分子對(duì)強(qiáng)光敏感，應(yīng)避免樣本長(zhǎng)時(shí)間暴露于強(qiáng)光下。
定期校準(zhǔn)儀器：伯樂公司提供光學(xué)校準(zhǔn)與溫控校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)模塊，應(yīng)定期使用以保持檢測(cè)性能。
選擇合適的熒光染料與通道：根據(jù)熒光通道激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)匹配不同染料，確保信號(hào)無交叉干擾。
隨著高通量檢測(cè)需求的不斷增長(zhǎng)以及分子診斷向POCT（即時(shí)檢測(cè)）方向發(fā)展，熒光定量PCR技術(shù)正朝以下方向演進(jìn)：
便攜式微型qPCR設(shè)備：適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)與疾病快速篩查；
數(shù)字PCR技術(shù)整合：提高定量精度，突破傳統(tǒng)Ct法限制；
AI數(shù)據(jù)分析與自動(dòng)化工作站結(jié)合：提升大數(shù)據(jù)背景下的樣本處理與解讀效率；
多組學(xué)平臺(tái)整合：結(jié)合qPCR與測(cè)序、質(zhì)譜等其他組學(xué)技術(shù)，推動(dòng)精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)發(fā)展。
伯樂熒光定量PCR儀以其精準(zhǔn)的溫控系統(tǒng)、高靈敏度的光學(xué)檢測(cè)模塊和靈活的分析軟件，已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中不可或缺的重要工具。其廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域和出色的性價(jià)比，使其在科研、醫(yī)療、農(nóng)業(yè)等多個(gè)行業(yè)中擁有廣泛的用戶基礎(chǔ)。隨著分子技術(shù)的持續(xù)發(fā)展和檢測(cè)需求的不斷提升，伯樂PCR儀將在推動(dòng)科學(xué)研究與臨床轉(zhuǎn)化方面發(fā)揮越來越重要的作用。
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