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二手羅氏熒光定量PCR儀詳解

（LightCycler 480 II 與 LightCycler 96）

一、概述

羅氏（Roche）的 LightCycler 系列熒光定量PCR儀在分子診斷和生命科學(xué)研究領(lǐng)域享有較高聲譽(yù)，其設(shè)計兼顧了熱循環(huán)精度、光學(xué)檢測靈敏度以及操作便捷性。無論是高通量科研項(xiàng)目，還是日常的中等規(guī)模檢測任務(wù)，該系列儀器都能提供穩(wěn)定、可重復(fù)的結(jié)果。

在二手市場，LightCycler 480 II 與 LightCycler 96 仍然具有較高的性價比，尤其適合預(yù)算有限但需要高質(zhì)量數(shù)據(jù)的實(shí)驗(yàn)室。得益于羅氏的硬件耐用性和光學(xué)系統(tǒng)的長壽命設(shè)計，即使是經(jīng)過多年使用的儀器，只要經(jīng)過專業(yè)檢測和維護(hù)，仍能保持出廠級的性能指標(biāo)。

二、主要型號與特點(diǎn)

1. LightCycler 480 II

• 貨號：05015278001

• 定位：高通量實(shí)時熒光定量PCR系統(tǒng)

• 通量能力：支持 96 孔板、384 孔板等多種板型，可一次性處理大規(guī)模樣本，非常適合高通量基因檢測項(xiàng)目、臨床批量檢測和多靶標(biāo)分析。

• 光學(xué)系統(tǒng)：采用多通道高靈敏度檢測技術(shù)，支持多色熒光檢測，可實(shí)現(xiàn)多重定量（Multiplexing）。

• 溫控系統(tǒng)：高性能Peltier模塊與實(shí)時溫度監(jiān)控，保證每個孔位的溫度均一性，減少擴(kuò)增偏差。

• 適用場景：轉(zhuǎn)錄組表達(dá)分析、病原體定量檢測、基因分型、SNP分析、拷貝數(shù)變異（CNV）檢測等。

優(yōu)勢亮點(diǎn)

1. 高通量支持，尤其適合需要短時間內(nèi)處理大量樣本的實(shí)驗(yàn)室。

2. 可更換樣本臺，靈活適配不同板型，減少耗材成本。

3. 軟件功能豐富，支持自動化數(shù)據(jù)分析和多種定量模式。

2. LightCycler 96

• 貨號：05815916001

• 定位：中等通量實(shí)時熒光定量PCR儀

• 通量能力：兼容 96 孔板及標(biāo)準(zhǔn) 8 聯(lián)管，適合日常實(shí)驗(yàn)和中小規(guī)模檢測任務(wù)。

• 光學(xué)系統(tǒng)：內(nèi)置四通道檢測，支持常見的SYBR Green、TaqMan探針及多色熒光分析。

• 溫控性能：升降溫速率適中，適合多種擴(kuò)增方案，保證重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

• 適用場景：基因表達(dá)分析、病原體核酸檢測、教學(xué)實(shí)驗(yàn)、質(zhì)量控制檢測等。

優(yōu)勢亮點(diǎn)

1. 界面簡潔、操作直觀，降低使用門檻。

2. 占用空間小，適合中小型實(shí)驗(yàn)室或移動實(shí)驗(yàn)車。

3. 軟件支持遠(yuǎn)程監(jiān)控與數(shù)據(jù)導(dǎo)出，便于團(tuán)隊(duì)協(xié)作與結(jié)果存檔。

三、核心工作原理

無論是 480 II 還是 96 型號，其熒光定量檢測原理均遵循實(shí)時熒光PCR的通用邏輯：

1. 熱循環(huán)擴(kuò)增

• 變性：高溫分離DNA雙鏈。

• 退火：引物與目標(biāo)序列結(jié)合。

• 延伸：DNA聚合酶合成新鏈。

• 通過Peltier半導(dǎo)體制冷/加熱，實(shí)現(xiàn)精確的三步循環(huán)：

• 每個循環(huán)中，模板DNA的拷貝數(shù)以指數(shù)級增長。

2. 熒光信號生成

• 在反應(yīng)體系中加入熒光染料（如SYBR Green）或熒光探針（如TaqMan）。

• 隨著目標(biāo)序列被擴(kuò)增，熒光信號與產(chǎn)物量成正比增加。

3. 實(shí)時檢測與Ct值計算

• 光學(xué)系統(tǒng)周期性采集熒光強(qiáng)度，軟件自動繪制擴(kuò)增曲線。

• 當(dāng)信號超過閾值時記錄為 Ct（Cycle threshold）值，Ct 值越小，初始模板量越高。

4. 數(shù)據(jù)分析

• 軟件可自動計算擴(kuò)增效率、建立標(biāo)準(zhǔn)曲線、進(jìn)行相對或絕對定量分析。

• 結(jié)合熔解曲線分析，可驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。

四、二手設(shè)備的優(yōu)勢與注意事項(xiàng)

1. 二手設(shè)備優(yōu)勢

• 性價比高：相較全新設(shè)備，價格通常可降低 40%–70%。

• 性能穩(wěn)定：羅氏的硬件設(shè)計壽命長，經(jīng)過維護(hù)的二手儀器仍能滿足大多數(shù)科研和檢測需求。

• 耗材通用性強(qiáng)：LightCycler 系列兼容多種常見板型與耗材，耗材成本可控。

2. 采購注意事項(xiàng)

• 確認(rèn)檢測性能：包括溫控均一性、升降溫速率、熒光靈敏度等。

• 檢查光學(xué)系統(tǒng)：避免濾光片老化或光源衰減導(dǎo)致信號不穩(wěn)定。

• 核查使用記錄：如運(yùn)行次數(shù)、維護(hù)記錄、是否經(jīng)過廠家或第三方校準(zhǔn)。

• 確認(rèn)軟件版本：確保與現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)方案和數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)兼容。

五、典型應(yīng)用領(lǐng)域

1. 科研領(lǐng)域

• 基因功能研究

• 病原微生物定量分析

• 基因表達(dá)譜分析

• 轉(zhuǎn)基因作物檢測

2. 臨床檢測

• 病毒載量監(jiān)測

• 遺傳病基因突變檢測

• 藥物代謝相關(guān)基因分型

3. 工業(yè)與質(zhì)控

• 食品安全檢測

• 環(huán)境樣品核酸監(jiān)測

• 生物制品質(zhì)量控制

六、性能比較表

七、總結(jié)

二手羅氏 LightCycler 480 II 與 LightCycler 96 雖在通量與功能定位上有所差異，但在核心性能上都體現(xiàn)了羅氏在熒光定量PCR領(lǐng)域的技術(shù)積累。

• 480 II 更適合高通量、多靶標(biāo)、批量化檢測場景，適合大型科研機(jī)構(gòu)與臨床實(shí)驗(yàn)室。

• 96 則以靈活性、操作便捷性和性價比見長，適合中小型實(shí)驗(yàn)室或教學(xué)單位。

在二手采購時，如果能夠結(jié)合自身樣本量、檢測類型和預(yù)算進(jìn)行選擇，并確保設(shè)備經(jīng)過完整的檢測與維護(hù)，這兩款儀器都能在多年內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定運(yùn)行，成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的重要工具。