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ViiA 7 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀是 Thermo Fisher Scientific 推出的一款高性能平臺(tái)，專為高通量、精密和自動(dòng)化操作而設(shè)計(jì)。該儀器支持多種反應(yīng)板格式（包括 96 孔、384 孔以及 TaqMan 微流控陣列卡），同時(shí)配備六通道檢測(cè)系統(tǒng)，可進(jìn)行多重?zé)晒鈾z測(cè)分析。其靈活性與兼容性使其在基礎(chǔ)科研、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)、遺傳病研究、臨床試劑開發(fā)等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。
在介紹操作流程前，了解其核心性能對(duì)熟練使用至關(guān)重要：
多格式支持：兼容 96 孔（0.1 mL 和 0.2 mL）、384 孔反應(yīng)板及 TaqMan Array 卡；
六通道熒光檢測(cè)系統(tǒng)：可同時(shí)檢測(cè)六種不同熒光染料；
VeriFlex 熱區(qū)技術(shù)：支持多溫區(qū)控溫，適合梯度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)；
高分辨率 CCD 檢測(cè)系統(tǒng)：確保靈敏度和重現(xiàn)性；
自動(dòng)開蓋裝置：提升上樣便捷性，適配自動(dòng)化平臺(tái)；
完整軟件控制平臺(tái)：包括 ViiA 7 Software 和云端 Connect 平臺(tái)。
溫度保持在 18～25°C；
儀器置于無塵、防震的工作臺(tái)；
禁止陽光直射，遠(yuǎn)離高頻磁場(chǎng)或噪音源。
檢查電源是否穩(wěn)定接通；
儀器主機(jī)電源開關(guān)位于背部右下角；
打開操作系統(tǒng)，確認(rèn)軟件正常加載，無錯(cuò)誤提示。
對(duì)應(yīng)孔板（0.1 mL、0.2 mL 或 384 孔）；
密封膜或光學(xué)封板；
離心機(jī)或板式離心器；
移液器與無酶濾芯吸頭；
熒光探針或 SYBR Green 反應(yīng)混合液；
DNA/cDNA 模板及引物。
啟動(dòng) ViiA 7 Software，登錄用戶賬戶。主界面包含以下模塊：
Experiment Setup（實(shí)驗(yàn)設(shè)置）；
Plate Setup（孔板布局）；
Run Method（運(yùn)行方案）；
Analysis（數(shù)據(jù)分析）；
Report（報(bào)告生成）。
點(diǎn)擊“New Experiment”，選擇實(shí)驗(yàn)類型，如：
絕對(duì)定量（Standard Curve）；
相對(duì)定量（ΔΔCt）；
SNP 分型；
熔解曲線分析（Melt Curve）；
拷貝數(shù)變異分析。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)定 PCR 反應(yīng)體系，包括反應(yīng)體積（一般為 10–25 μL）、熒光染料類型（SYBR Green 或 TaqMan）、是否使用參考染料（如 ROX）等。
典型三步 PCR 熱循環(huán)設(shè)置如下：
初始變性：95°C，10分鐘；
變性：95°C，15秒；
退火/延伸：60°C，1分鐘（重復(fù) 40 周期）；
熔解曲線分析（如需）：60–95°C，增量為0.3°C。
可自定義熱區(qū)（VeriFlex 模塊）以優(yōu)化引物退火溫度。
在 Plate Setup 中配置：
每個(gè)孔的實(shí)驗(yàn)名稱（Sample Name）；
靶基因名稱（Target）；
引物/探針染料；
生物/技術(shù)重復(fù)設(shè)置；
陰陽性對(duì)照標(biāo)注。
可以使用導(dǎo)入模板批量添加樣品布局。
按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)添加模板 DNA、引物、探針或染料；
使用濾芯吸頭避免交叉污染；
加樣完畢后將反應(yīng)板輕輕離心，去除氣泡。
使用光學(xué)封板確保密閉性；
若使用 Array 卡，將卡插入卡槽并校準(zhǔn)；
檢查無液體殘留在板緣，以免污染加熱模塊。
打開上蓋；
將孔板正確定向插入槽中；
系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)識(shí)別孔板類型。
點(diǎn)擊“Start Run”；
軟件將實(shí)時(shí)顯示熒光擴(kuò)增曲線；
實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)根據(jù)循環(huán)次數(shù)及模塊配置而定（通常40周期約需1小時(shí)30分鐘）。
實(shí)驗(yàn)完成后，系統(tǒng)自動(dòng)切換至 Analysis 頁面，展示擴(kuò)增曲線、閾值線和結(jié)果表。
軟件可自動(dòng)設(shè)定基線與閾值；
也可手動(dòng)拖動(dòng)閾值線，調(diào)整 Ct 計(jì)算；
確保閾值設(shè)定在線性對(duì)數(shù)放大階段。
導(dǎo)入標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品；
軟件自動(dòng)生成 Ct vs log(copy number) 標(biāo)準(zhǔn)曲線；
結(jié)果以 copies/μL 或 log10 表示。
設(shè)定參考基因（如 GAPDH）；
選擇校準(zhǔn)樣本作為相對(duì)值基礎(chǔ)；
系統(tǒng)生成折疊變化（fold change）結(jié)果及誤差柱狀圖。
設(shè)定 VIC 和 FAM 熒光通道；
分析模塊將自動(dòng)繪制等位基因聚類圖；
結(jié)果分為純合、雜合和未定型。
曲線應(yīng)具備單一峰值；
多峰表示非特異性擴(kuò)增或引物二聚體；
可輔助判斷反應(yīng)體系優(yōu)化程度。
可將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)導(dǎo)出為 Excel、PDF 或 TXT 格式；
報(bào)告中可包含樣品列表、Ct 值、熔解曲線圖等；
報(bào)告可自定義頁眉、頁腳、實(shí)驗(yàn)編號(hào)、簽名位置等。
每周清潔樣品臺(tái)；
定期檢查熱循環(huán)模塊平整度；
使用原廠光學(xué)配件和板材；
若長(zhǎng)時(shí)間停機(jī)，關(guān)閉電源，拔掉電纜。
使用 Connect 平臺(tái)可自動(dòng)接收更新通知；
建議實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即備份數(shù)據(jù)至本地或云端。
| 問題類型 | 可能原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
| 無法啟動(dòng) | 電源松動(dòng) | 檢查背部電源接頭 |
| 曲線異常 | 泡沫、污染、過量熒光 | 重做加樣、離心、檢查濃度 |
| Ct值漂移 | 光學(xué)老化、探針失效 | 重新制備探針混合液 |
| 不識(shí)別板型 | 插入錯(cuò)誤方向 | 檢查是否正插 |
基因表達(dá)分析：檢測(cè)基因上調(diào)或下調(diào)趨勢(shì)；
腫瘤突變識(shí)別：快速鎖定特定 SNP；
病原體檢測(cè)：高敏度核酸定量篩查；
藥物篩選：評(píng)估基因反應(yīng)活性；
拷貝數(shù)變異：用于遺傳學(xué)研究與個(gè)體化醫(yī)學(xué)；
臨床基因診斷開發(fā)：配合TaqMan探針庫使用。
ViiA 7 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀器集成了六通道檢測(cè)系統(tǒng)、靈活板型支持、精密熱控和智能軟件分析平臺(tái)，為用戶提供從樣品制備到結(jié)果報(bào)告的一體化實(shí)時(shí) PCR 解決方案。其高通量、高精度及自動(dòng)化兼容特性使其適應(yīng)當(dāng)今科研與診斷環(huán)境的多樣化需求。
在熟悉操作流程基礎(chǔ)上，用戶可以靈活擴(kuò)展實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)如拷貝數(shù)變異分析、熔解曲線分型、單核苷酸多態(tài)性分型等高級(jí)應(yīng)用，為精準(zhǔn)醫(yī)療與分子研究提供強(qiáng)大支撐。
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