賽默飛Wellwash 1x8洗板機實驗流程

一、前言

在ELISA及其他基于微孔板的免疫學(xué)、分子生物學(xué)與生物化學(xué)實驗中，洗板步驟直接關(guān)系到檢測的靈敏度和特異性。人工清洗往往因操作不均導(dǎo)致背景信號升高或結(jié)果偏差，而賽默飛Wellwash 1x8洗板機通過自動化、標(biāo)準(zhǔn)化的流程，實現(xiàn)了快速、均一、低殘留的清洗。本手冊旨在為用戶提供完整的實驗流程說明，以便在實際操作中獲得穩(wěn)定、可靠的實驗結(jié)果。

二、實驗準(zhǔn)備階段

1. 儀器檢查

• 電源確認：確保接入AC 220V、接地良好的電源插座。

• 外觀檢查：確認機身無破損，面板顯示正常。

• 液路確認：洗液瓶、廢液瓶管路連接正確且無泄漏。

• 洗針檢查：8針排列整齊，無堵塞或彎曲。

2. 試劑與耗材準(zhǔn)備

• 洗液：常用PBS緩沖液或含Tween-20的洗液，根據(jù)實驗方案配制。

• 微孔板：標(biāo)準(zhǔn)96孔酶標(biāo)板，底型可為平底、圓底或V底。

• 廢液容器：容量≥2 L，帶液位報警傳感器。

• 吸水紙或擦拭紙：用于板底殘液去除。

3. 預(yù)沖洗

• 開機后，用蒸餾水運行一次沖洗程序，排除管路中空氣與殘液。

三、實驗流程

1. 裝載酶標(biāo)板

• 打開托盤，將待洗酶標(biāo)板放置在固定槽中，確保方向正確、孔位居中。

• 關(guān)閉托盤，等待系統(tǒng)自動定位。

2. 參數(shù)設(shè)定

在控制面板輸入或調(diào)用預(yù)設(shè)程序：

• 加液體積：50–1000 μL/孔，常用為300 μL。

• 沖洗次數(shù)：1–10次，根據(jù)實驗要求設(shè)置，常用3–5次。

• 浸泡時間：0–3600秒，通常為30–60秒。

• 震蕩模式：可開或關(guān)，增強液體與孔壁接觸。

• 抽吸強度與時間：設(shè)定真空壓力和抽液持續(xù)時間，保證殘液≤1 μL/孔。

3. 洗滌循環(huán)

一個完整的循環(huán)包括以下步驟：

1. 加液：泵體驅(qū)動清洗液經(jīng)8針同步注入微孔板的一行。

2. 浸泡：液體在孔內(nèi)停留設(shè)定時間，促進去除非特異性結(jié)合物。

3. 震蕩：托盤產(chǎn)生輕微振動，改善清洗均一性。

4. 抽液：通過負壓系統(tǒng)快速將孔內(nèi)液體吸入廢液瓶。

5. 重復(fù)：根據(jù)程序設(shè)置進行多次循環(huán)，逐行完成全板清洗。

4. 洗后處理

• 實驗結(jié)束后取出微孔板，用吸水紙輕觸底部去除殘余液滴。

• 立即進入加底物或下一實驗步驟，避免孔內(nèi)干燥。

四、實驗注意事項

1. 參數(shù)優(yōu)化

• 不同實驗對殘液量要求不同，若信號背景高，可增加沖洗次數(shù)或延長抽吸時間。

• 對于高結(jié)合力底物，可適當(dāng)延長浸泡。

2. 洗液選擇

• PBS或Tris緩沖液為常用選擇。

• 若需提高去污力，可加入少量非離子型去污劑（如Tween-20）。

• 嚴禁使用強酸、強堿或有機溶劑，以免腐蝕泵體與管路。

3. 微孔板兼容性

• 平底板適合大多數(shù)ELISA實驗。

• V底板在細胞沉降實驗中更佳，但抽液需避免損傷沉降層。

4. 實驗節(jié)奏

• 洗板后應(yīng)立即進行后續(xù)操作，避免因干燥導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)改變或非特異性結(jié)合。

五、清洗效果評估

1. 殘液檢測

• 在清洗后空孔中加入顯色底物，通過酶標(biāo)儀測定背景值，殘液少則背景低。

2. 均一性評價

• 對比不同孔位清洗后的信號值差異，偏差小于10%為佳。

3. 交叉污染檢測

• 在相鄰孔中加入染料，清洗后觀察是否有液體擴散至其他孔。

六、后處理與維護

1. 實驗后沖洗

• 使用蒸餾水運行清洗程序5分鐘，沖掉殘余鹽類和蛋白。

2. 廢液處理

• 廢液瓶清空并沖洗，嚴格按照實驗室廢棄物規(guī)范處理。

3. 洗針保養(yǎng)

• 每周進行一次超聲清洗，防止堵塞。

• 若發(fā)現(xiàn)針尖彎曲，應(yīng)立即更換。

4. 長期停機

• 排空液路并吹干，存放于干燥環(huán)境。

七、常見問題及處理

1. 液體分配不均

• 檢查泵速、管路和針頭是否堵塞。

2. 殘液量過大

• 增加抽吸時間或檢查抽液系統(tǒng)密封性。

3. 板孔間污染

• 確認針頭無滴液現(xiàn)象，必要時降低抽液強度。

4. 儀器報警

• 廢液瓶滿溢或液路異常，應(yīng)立即停機處理。

八、實驗應(yīng)用示例

1. 臨床檢測

• 乙肝、艾滋病抗體ELISA檢測，需多次沖洗以減少背景信號。

2. 食品安全

• 檢測食品中農(nóng)藥殘留時，洗板機保證抗體結(jié)合的特異性。

3. 科研實驗

• 蛋白質(zhì)互作實驗中，清洗精度決定結(jié)合曲線的穩(wěn)定性。

九、流程優(yōu)化與建議

1. 合理設(shè)置程序庫

• 將常用實驗方案存入內(nèi)存，減少重復(fù)設(shè)置。

2. 配合實驗節(jié)拍

• 在大批量檢測中，應(yīng)合理安排加樣、孵育與洗板的時間銜接。

3. 實驗室規(guī)范化

• 建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP），保證不同人員操作結(jié)果一致。

十、總結(jié)

賽默飛Wellwash 1x8洗板機通過 1×8通道同步清洗、程序化液體分配與抽吸、低殘液控制，實現(xiàn)了實驗過程中的高效、均一與標(biāo)準(zhǔn)化。
其實驗流程涵蓋 準(zhǔn)備、參數(shù)設(shè)定、清洗循環(huán)、后處理與維護，能夠顯著提升ELISA及其他基于微孔板實驗的可靠性。
通過科學(xué)的流程控制與日常維護，用戶可以在臨床、科研、食品安全等多領(lǐng)域獲得穩(wěn)定、可重復(fù)的實驗結(jié)果。