伯樂（Bio-Rad）Gene Pulser Xcell 電穿孔系統(tǒng)（包括1652660型號） 的快速操作指導(dǎo)，適用于日?；蜣D(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。此流程為標(biāo)準(zhǔn)化操作簡要，幫助用戶快速、高效、安全地完成一次完整的電穿孔實(shí)驗(yàn)：

伯樂 Gene Pulser Xcell 電穿孔系統(tǒng)

快速操作指南（Quick Start Guide）

一、設(shè)備準(zhǔn)備

1. 檢查組件連接

• 確保主機(jī)、CE 模塊（用于指數(shù)波）或 PC 模塊（用于方波）已正確連接；

• ShockPod 電擊槽已插入主機(jī)并就位；

• 電源線連接穩(wěn)固，打開主電源開關(guān)。

2. 預(yù)熱細(xì)胞與緩沖液

• 使用專用電穿孔緩沖液（如 Bio-Rad Gene Pulser Buffer）；

• 細(xì)胞應(yīng)處于對數(shù)生長期，低鈣無血清狀態(tài)最佳；

• 樣品溫度控制在冰上或4℃，電穿孔后立即恢復(fù)至37℃。

二、樣品準(zhǔn)備

1. 混合樣品

• 合適濃度的細(xì)胞（約1×10?）；

• 質(zhì)粒DNA或RNA（通常為0.1–10 μg）；

• 緩沖液補(bǔ)足至合適體積（10–500 μL，依據(jù)電擊杯大小）。

• 在1.5 mL無酶管中加入：

2. 去除氣泡

• 輕輕彈擊比色皿或使用微量離心，確保無氣泡；

• 將混合液轉(zhuǎn)移至電擊杯中（0.2 cm / 0.4 cm 電極間距視細(xì)胞類型選擇）。

三、電穿孔設(shè)置

1. 選擇波形模式

• 真核細(xì)胞：選擇 指數(shù)波（Exponential Decay）；

• 原核細(xì)胞（細(xì)菌、酵母）：選擇 方波（Square Wave）。

2. 設(shè)定參數(shù)（參考值）

• 電壓：1,800–2,500 V（0.2 cm 杯）；

• 脈沖時間：5 ms；

• 重復(fù)次數(shù)：1–2 次。

• 電壓：250–300 V（0.4 cm 杯）；

• 電容：250 μF；

• 電阻：∞；

• 哺乳動物細(xì)胞（指數(shù)波）：

• 細(xì)菌（方波）：

3. 保存設(shè)置（可選）

• 使用界面保存為自定義 protocol，便于重復(fù)實(shí)驗(yàn)調(diào)用。

四、執(zhí)行電穿孔

1. 插入電擊杯

• 將裝有樣品的比色皿放入 ShockPod 中；

• 關(guān)閉蓋子或壓緊槽位確保安全接觸。

2. 按下【Pulse】鍵

• 系統(tǒng)釋放脈沖；

• 屏幕將顯示電壓、脈沖時間與電阻結(jié)果；

• 若出現(xiàn)電弧，需重新準(zhǔn)備樣品并檢查液面。

3. 立即移出樣品

• 將細(xì)胞從比色皿轉(zhuǎn)移至溫?zé)岬呐囵B(yǎng)液中進(jìn)行恢復(fù)（如添加預(yù)熱DMEM + FBS）；

• 靜置 5–10 分鐘后可接種入培養(yǎng)皿或離心收集繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

五、結(jié)束操作與清潔

1. 取出比色皿，清洗干燥備用；

2. 關(guān)閉主機(jī)電源，斷開電源插頭；

3. 清潔 ShockPod 電擊槽（干布擦拭）；

4. 如長時間不使用，請覆蓋防塵罩保存設(shè)備。

六、常見問題速查