現(xiàn)貨現(xiàn)發(fā)隔天到達(dá)
真人真事真本事
咨詢熱線13158823830
咨詢熱線13158823830
電穿孔技術(shù)是一種將外源分子（如 DNA、RNA、蛋白質(zhì)等）導(dǎo)入細(xì)胞的常用方法，具有高效率、適用范圍廣等優(yōu)勢。伯樂電穿孔儀（Gene Pulser Xcell）以其模塊化設(shè)計(jì)、高度精準(zhǔn)的脈沖控制系統(tǒng)與人性化界面，在全球生命科學(xué)研究中被廣泛使用。正確的操作流程與規(guī)范的使用細(xì)則是保障實(shí)驗(yàn)成功與設(shè)備壽命的關(guān)鍵。
本說明將圍繞該儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作流程、日常使用技巧及安全事項(xiàng)展開，幫助實(shí)驗(yàn)人員全面掌握使用要點(diǎn)，提升操作效率與實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。
在正式啟動設(shè)備前，應(yīng)對實(shí)驗(yàn)流程、試劑準(zhǔn)備、細(xì)胞狀態(tài)等因素進(jìn)行全面檢查和準(zhǔn)備。
選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞：確保細(xì)胞處于生長活躍階段，有利于電穿孔后恢復(fù)。
洗滌與重懸：使用無血清培養(yǎng)基或電穿孔緩沖液對細(xì)胞進(jìn)行2–3次清洗，移除干擾因素。
調(diào)整細(xì)胞密度：建議控制在 1×10? – 1×10? cells/mL 的范圍，根據(jù)細(xì)胞類型適當(dāng)調(diào)整。
質(zhì)粒 DNA 或 RNA：應(yīng)為高純度，無蛋白污染；濃度一般控制在50–200 ng/μL。
siRNA、蛋白質(zhì)等：根據(jù)分子量與電荷特性調(diào)整緩沖體系，避免離子強(qiáng)度過高。
應(yīng)使用專用電穿孔緩沖液或低導(dǎo)電性溶液（如Hepes、PBS變體）。
禁用含鈣鎂或高鹽濃度的培養(yǎng)液，以免產(chǎn)生電弧或殺傷細(xì)胞。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇0.1 cm、0.2 cm或0.4 cm間隙的比色皿。
保證干凈、無裂痕，避免殘留液體污染ShockPod電極。
插入主控單元電源，接通AC電源線。
根據(jù)需要連接CE模塊（指數(shù)波）或PC模塊（方波）；系統(tǒng)將自動識別并提示。
插入ShockPod模塊，確保連接緊密、無松動。
開機(jī)后，設(shè)備進(jìn)入自檢狀態(tài)，檢查模塊、顯示屏、溫度等。
出現(xiàn)主菜單后可進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置、程序選擇或用戶設(shè)定界面。
將處理好的細(xì)胞與外源分子混合后，輕輕移入比色皿中（建議加樣量20–100 μL）。
避免氣泡形成，氣泡會影響電場均勻性。
插入比色皿至ShockPod中，儀器將自動檢測是否就位。
根據(jù)細(xì)胞類型選擇合適參數(shù)：
| 類型 | 波形 | 電壓（V） | 電容/寬度 | 比色皿間隙 |
|---|---|---|---|---|
| 哺乳細(xì)胞 | 指數(shù)波 | 250–350 | 950–1250 μF | 0.4 cm |
| 細(xì)菌 | 方波 | 1500–2000 | 5 ms | 0.1 cm |
| 酵母 | 方波 | 1200–1600 | 5–7 ms | 0.2 cm |
| 原生質(zhì)體 | 指數(shù)波 | 400–600 | 1250–2000 μF | 0.4 cm |
脈沖數(shù)設(shè)定：多數(shù)實(shí)驗(yàn)設(shè)為1–3次，間隔0.5–1秒。
儲存與調(diào)用：可將當(dāng)前設(shè)置保存為程序編號，供下次調(diào)用。
按下“Pulse”按鈕啟動。
儀器會自動顯示輸出電壓、電流與電阻，并發(fā)出操作完成提示音。
若出現(xiàn)異常（如電?。?，系統(tǒng)將中斷操作并提示報(bào)警。
電穿孔完成后，立即將細(xì)胞從比色皿中移至預(yù)溫的恢復(fù)液或培養(yǎng)基中孵育5–10分鐘。
某些細(xì)胞可立即接種至培養(yǎng)板繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如報(bào)告基因檢測、轉(zhuǎn)染效率評估等。
電穿孔過程中存在高壓輸出，嚴(yán)禁在比色皿未就位狀態(tài)下啟動脈沖操作。
操作人員應(yīng)戴防護(hù)手套、穿實(shí)驗(yàn)服，避免皮膚直接接觸電極。
設(shè)備需接地良好，避免電擊或電流回流造成損壞。
電弧放電可能導(dǎo)致樣品燒毀、細(xì)胞死亡或設(shè)備損壞：
使用干凈、無裂的比色皿。
徹底移除混合液中的氣泡。
使用導(dǎo)電性合適的緩沖液，不可含有氯離子、鈣鎂等雜質(zhì)。
避免樣品體積過少，電極接觸空氣會增強(qiáng)電阻。
初次實(shí)驗(yàn)建議從較低電壓開始試探，逐步優(yōu)化。
電壓、電容過高會導(dǎo)致高熱積聚、細(xì)胞灼傷。
方波寬度過大亦可引起膜破裂不可逆。
每次使用后立即用無RNA酶水或70%乙醇沖洗干凈。
如比色皿反復(fù)使用，應(yīng)高壓滅菌并干燥存放。
不建議重復(fù)使用超過10次。
定期用棉簽蘸無水乙醇清潔ShockPod電極表面。
清理過程中不得滴入液體至設(shè)備內(nèi)部。
每月檢查電源插頭與模塊接口是否松動，避免因接觸不良引發(fā)工作異常。
關(guān)閉主機(jī)電源后，拔掉電源線并用防塵罩覆蓋。
存放于干燥、恒溫實(shí)驗(yàn)室中，避免陽光直射或強(qiáng)電磁干擾環(huán)境。
| 問題現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決措施 |
|---|---|---|
| 不輸出脈沖 | 比色皿未插緊或電極接觸不良 | 檢查插槽，重新插入比色皿 |
| 出現(xiàn)火花、電弧 | 樣品中有氣泡、導(dǎo)電性過強(qiáng) | 更換緩沖液、重新制備混合液 |
| 脈沖中斷或提示報(bào)警 | 電壓/電容設(shè)置超出負(fù)載范圍 | 調(diào)低參數(shù)，參考推薦值重新設(shè)定 |
| 細(xì)胞死亡率高 | 電擊強(qiáng)度過大或未充分恢復(fù)培養(yǎng) | 調(diào)整參數(shù)，優(yōu)化細(xì)胞處理過程 |
| 電極變黑或腐蝕嚴(yán)重 | 長期未清洗或使用強(qiáng)腐蝕性液體 | 更換電極，建立每次使用后的清潔流程 |
控制室溫與細(xì)胞溫度：保持20–25℃室溫，細(xì)胞應(yīng)在冰上處理，減緩膜修復(fù)速率。
緩沖液選擇恰當(dāng)：優(yōu)選無離子雜質(zhì)、低導(dǎo)電的專用緩沖液。
細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定：使用活力高、無污染、對數(shù)期細(xì)胞。
脈沖優(yōu)化：適當(dāng)調(diào)節(jié)脈沖寬度、間隔時(shí)間，提高外源物質(zhì)進(jìn)入幾率。
伯樂電穿孔儀是當(dāng)前細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)中的經(jīng)典設(shè)備之一，憑借其可調(diào)參數(shù)范圍廣、操作界面清晰、兼容性強(qiáng)等優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、基因工程、免疫學(xué)、干細(xì)胞研究等多個(gè)領(lǐng)域。掌握科學(xué)的操作流程和規(guī)范的注意事項(xiàng)，不僅能顯著提升轉(zhuǎn)染成功率，也能延長儀器使用壽命、降低故障發(fā)生概率。
實(shí)驗(yàn)人員在每次使用前應(yīng)進(jìn)行充分的準(zhǔn)備與評估，在使用過程中嚴(yán)格遵循安全流程，并在使用后做好維護(hù)保養(yǎng)工作。唯有如此，方能在高效、高質(zhì)的基礎(chǔ)上，持續(xù)推動科學(xué)實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)步開展。
