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檢查儀器外殼有無破損，內(nèi)部部件是否安裝牢固；
確認毛細管陣列已正確安裝，無翹曲、折斷、連接松動；
檢查電源接口、數(shù)據(jù)線連接是否穩(wěn)固，配件是否齊全（聚合物袋、緩沖瓶、樣本盤等）；
儀器內(nèi)部溫控模塊、激光系統(tǒng)、電源模塊需無異常提示。
啟動Data Collection軟件，檢查界面是否能識別毛細管陣列編號；
檢查軟件是否能正確識別溫度、電壓、毛細管狀態(tài)等；
測試樣本板加載與彈出動作是否靈敏；
檢查樣本板掃描功能是否準確定位孔位；
確認各項運行日志、報警日志是否能正常導出。
激光燈源啟動后是否正常穩(wěn)定；
查看檢測通道（FAM、VIC、NED、PET、LIZ等）是否可被識別；
進行一次無樣本運行，確認激發(fā)系統(tǒng)無光路偏差。
使用推薦的測試標準，如Thermo Fisher提供的定量DNA Ladder或多重PCR產(chǎn)物；
準備標準樣本，進行實際電泳運行；
檢查毛細管分離能力是否良好，片段峰形是否清晰、對稱；
判斷峰位對應的片段長度是否與理論標準一致，偏差應在±1bp范圍內(nèi)。
啟動聚合物加載程序，檢測聚合物是否順利注入毛細管；
檢查聚合物流速、壓力是否穩(wěn)定，避免出現(xiàn)聚合物殘留或氣泡阻塞；
對比聚合物粘度設定值與實際運行表現(xiàn)，確保參數(shù)一致。
設置不同的進樣電壓（1.2–1.6 kV）和時間（10–20秒）進行測試；
檢測是否存在因進樣不均造成的峰形異常；
調(diào)整進樣時間可評估系統(tǒng)靈敏度與重復性。
選擇1~3個已知STR類型的樣本，每個樣本平行分裝為3份；
采用完全相同的反應體系和電泳設置進行分析；
比較每次運行所得電泳圖譜中各條峰的位置、峰高、峰面積；
峰位偏差控制在±0.5bp以內(nèi)，峰高CV值不高于15%，否則需檢查系統(tǒng)穩(wěn)定性。
使用微衛(wèi)星或多重PCR產(chǎn)物，測試200–400 bp范圍的片段；
在峰間距為1~2 bp時是否能完全區(qū)分不同片段；
評估儀器在復雜樣本背景下的分辨性能。
ROX 500或600標準品作為片段校準基準；
比對每一運行中標準峰的實際大小與預設值；
偏差應不超過±0.3 bp，大小標準的校準擬合曲線應平滑、連續(xù)。
取梯度稀釋的DNA模板（例如10 ng、1 ng、0.1 ng、0.05 ng）進行PCR；
每種濃度電泳測試，觀察峰值高度、是否出現(xiàn)丟峰現(xiàn)象；
記錄最低檢測濃度下仍能識別所有片段的靈敏度；
正常儀器靈敏度應達到0.05~0.1 ng/μL。
使用多重熒光標記PCR產(chǎn)物，如DS-33染料集；
檢查FAM、VIC、NED、PET等通道信號是否均衡；
若某一通道信號顯著偏低，應檢查光學系統(tǒng)清潔情況或激光路徑校準。
準備PCR空白反應液（不含DNA模板），上樣電泳；
檢查是否出現(xiàn)無源背景峰或污染峰；
空白樣本中如出現(xiàn)明顯熒光信號，應懷疑系統(tǒng)存在交叉污染或聚合物殘留。
在兩個不同STR譜型樣本之間插入純水或空白孔；
如在空白孔中檢測到與相鄰樣本一致的峰值，則說明存在拖尾污染；
建議更換進樣針或清洗樣本加載模塊。
軟件中觀察未上樣孔的基線圖譜；
背景應低于100 RFU，如超過此值，考慮光路干擾或緩沖液污染。
安排樣本在不同時間段、連續(xù)運行12小時以上；
記錄每次運行的峰位、峰高、進樣狀態(tài)、電壓波動等參數(shù)；
觀察是否出現(xiàn)信號衰減、毛細管堵塞或聚合物流動異常等現(xiàn)象。
記錄POP-7在多次運行后信號一致性變化；
分析是否隨著使用次數(shù)增加出現(xiàn)聚合物降解現(xiàn)象；
設定聚合物有效使用周期（如100次或14天）并進行更換提示驗證。
啟動GeneMapper或GeneMarker軟件，導入.fsa原始文件；
測試軟件的自動峰識別、校準、片段命名功能；
檢查結果圖譜、峰面積計算是否準確；
檢查結果輸出格式（Excel、PDF等）是否支持實驗室數(shù)據(jù)標準；
測試是否能將分析結果上傳至實驗室信息管理系統(tǒng)（LIMS）；
驗證分析模板是否能定制以適配不同實驗需求。
設備到貨后，廠家通常提供一套驗收測試項目。以下是推薦驗收測試核心指標：
| 測試項目 | 評估指標 | 合格標準 |
|---|---|---|
| 毛細管通道檢查 | 所有通道信號正常，無堵塞 | 8通道/24通道均可工作 |
| 信號強度 | 所有熒光通道均能檢測到標準信號 | 信號峰值 ≥1500 RFU |
| 大小標準校準精度 | 每個峰定位與標準差距 ≤0.3 bp | R2 > 0.99 擬合優(yōu)良 |
| 片段分辨能力 | 2 bp 間距能清晰區(qū)分 | 峰形不拖尾、無疊加 |
| 樣本一致性 | 重復樣本CV值 ≤15% | 峰位差 ≤0.5 bp |
| 空白污染檢查 | 空白孔無有效信號 | 全部背景 <100 RFU |
| 問題現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
| 電泳信號消失或很低 | 樣本降解、毛細管堵塞、聚合物干涸 | 更換樣本、沖洗陣列、更換聚合物 |
| 信號過強峰頂截斷 | 上樣濃度過高、進樣時間過長 | 稀釋PCR產(chǎn)物、縮短進樣時間 |
| ROX標準峰漂移 | 熱變性不足、模板變性不徹底 | 重新熱變性處理樣本 |
| 進樣順序錯亂 | 樣本板未校準、軟件設置錯誤 | 重新加載樣本板并核對樣本表 |
| 軟件不識別激光系統(tǒng) | 激光未啟動或線路故障 | 檢查連接、聯(lián)系廠家技術人員支持 |
賽默飛3500基因分析儀是一臺性能優(yōu)異的DNA分型設備，其工作穩(wěn)定性和分析能力依賴于規(guī)范的測試和調(diào)試流程。通過全面的設備測試，包括性能驗證、樣本一致性、污染控制、信號靈敏度與數(shù)據(jù)精度檢測，能夠有效確保儀器長期高效運行，為后續(xù)的實驗分析提供可靠保障。
建議每間實驗室在設備正式投入使用前完成一次完整的設備性能評估，并建立周期性測試與維護檔案，以確保系統(tǒng)始終處于最優(yōu)工作狀態(tài)。
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