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賽默飛3500系列分析儀根據(jù)通道數(shù)量分為3500（8通道）與3500xL（24通道）兩種常用型號(hào)。無(wú)論哪一型號(hào)，其主要核心模塊包括以下幾部分：
用于DNA片段的分離；
材質(zhì)為石英毛細(xì)管，標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)度36cm；
通道數(shù)量決定一次可并行檢測(cè)的樣本數(shù)量。
采用多色激光激發(fā)，能同時(shí)檢測(cè)多種熒光標(biāo)記；
具備高度靈敏的CCD檢測(cè)器；
支持多種熒光染料組合，如DS-30、DS-33、G5等。
通過(guò)自動(dòng)泵送方式將高分子聚合物注入毛細(xì)管；
常用聚合物類(lèi)型包括POP-4、POP-6與POP-7；
可自動(dòng)監(jiān)測(cè)聚合物余量，提示更換。
配備樣本盤(pán)與反應(yīng)板模塊；
支持384孔微孔板或96孔PCR板；
自動(dòng)控制進(jìn)樣電壓與進(jìn)樣時(shí)間。
毛細(xì)管電泳區(qū)具有恒溫系統(tǒng)，常設(shè)60°C；
高壓電泳電源輸出穩(wěn)定，確保片段分離清晰。
樣本DNA需純度高（A260/A280 ≈1.8）；
濃度范圍通常控制在10-50 ng/μL；
可采用磁珠法、柱提法或酚氯仿法進(jìn)行提取。
| 成分 | 體積 | 備注 |
|---|---|---|
| PCR Master Mix | 5 μL | 含Taq酶、緩沖液、dNTPs等 |
| 引物混合液（帶熒光） | 1 μL | 上游或下游帶FAM/VIC等標(biāo)記 |
| 樣本DNA模板 | 1 μL | 濃度建議不超過(guò)30 ng |
| 超純水 | 3 μL | 調(diào)整總體積 |
預(yù)變性：95°C，5分鐘；
變性：95°C，30秒；
退火：55~60°C，30秒；
延伸：72°C，45秒；
循環(huán)：30~35次；
終末延伸：72°C，5分鐘；
4°C保存待用。
每個(gè)上樣孔中需加入：
| 成分 | 體積 | 說(shuō)明 |
|---|---|---|
| Hi-Di Formamide | 9.5 μL | 電泳專(zhuān)用去離子甲酰胺溶液 |
| ROX Size Standard | 0.5 μL | 內(nèi)標(biāo)大小標(biāo)準(zhǔn)（如GeneScan 600） |
| PCR產(chǎn)物 | 1 μL | 按需加入 |
混合后充分離心，在95°C加熱2分鐘，迅速冰浴處理，確保樣品變性狀態(tài)一致。
毛細(xì)管長(zhǎng)度：36cm；
聚合物類(lèi)型：POP-7；
電泳緩沖液：1× Genetic Analyzer Buffer with EDTA；
進(jìn)樣電壓：1.2 kV；
進(jìn)樣時(shí)間：15秒；
電泳電壓：13.0 kV；
分離時(shí)間：1550秒；
毛細(xì)管溫度：60°C；
樣品板溫度：4°C。
| 耗材名稱(chēng) | 功能用途 |
|---|---|
| 毛細(xì)管陣列 | DNA片段電泳分離核心通道 |
| 聚合物POP系列 | 分離介質(zhì) |
| Hi-Di Formamide | 上樣溶劑，防止樣品沉淀或團(tuán)聚 |
| 緩沖液（10×） | 保持電泳系統(tǒng)電導(dǎo)穩(wěn)定 |
| 熒光引物混合液 | 實(shí)現(xiàn)多重標(biāo)記檢測(cè) |
| ROX 500/600標(biāo)準(zhǔn)品 | 片段大小校準(zhǔn)內(nèi)參 |
聚合物需4°C保存，避免反復(fù)凍融；
ROX標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)避光、冷凍存儲(chǔ)；
Formamide每次開(kāi)封應(yīng)盡快使用，避免氧化降解；
使用過(guò)的毛細(xì)管陣列如出現(xiàn)信號(hào)衰減應(yīng)及時(shí)更換。
用于儀器控制、運(yùn)行方案編輯與樣品管理；
可設(shè)定進(jìn)樣方式、樣本順序、電泳時(shí)間等；
提供運(yùn)行監(jiān)控界面，實(shí)時(shí)顯示狀態(tài)信息。
自動(dòng)峰識(shí)別、大小標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)；
可設(shè)置分析模板，快速進(jìn)行STR或SNP分析；
輸出圖譜清晰、峰形整齊，具備高精度分辨率。
支持導(dǎo)出.fsa格式原始數(shù)據(jù)；
可連接LIMS系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)記錄；
兼容第三方法醫(yī)或突變檢測(cè)軟件處理。
室溫控制在18~25°C；
相對(duì)濕度不超過(guò)60%，防止聚合物變質(zhì)；
配備UPS不間斷電源，防止實(shí)驗(yàn)中斷。
| 維護(hù)內(nèi)容 | 建議頻率 | 操作說(shuō)明 |
|---|---|---|
| 聚合物更換 | 每使用120樣品或14天 | 系統(tǒng)提示更換時(shí)立即處理 |
| 緩沖液更換 | 每次運(yùn)行前 | 確保離子濃度足夠，避免電泳失敗 |
| 毛細(xì)管沖洗 | 每周至少1次 | 避免毛細(xì)管堵塞、信號(hào)下降 |
| 清潔廢液瓶與排液管 | 每周 | 防止廢液倒流污染電泳系統(tǒng) |
| 軟件校準(zhǔn)檢測(cè) | 每月 | 確保峰位識(shí)別準(zhǔn)確 |
避免在運(yùn)行時(shí)打開(kāi)前艙門(mén)；
聚合物與Formamide屬有機(jī)溶劑，應(yīng)佩戴手套操作；
禁止操作時(shí)食用、飲水或用嘴吹液體；
使用后及時(shí)密封所有耗材，避免污染和降解。
| 現(xiàn)象 | 原因分析 | 處理建議 |
|---|---|---|
| 電泳圖無(wú)峰 | 樣本未上樣或聚合物堵塞 | 檢查樣本準(zhǔn)備流程、清洗毛細(xì)管 |
| 峰形模糊或拖尾 | 聚合物老化或毛細(xì)管污染 | 更換聚合物或重新沖洗陣列 |
| 峰高信號(hào)弱 | 引物標(biāo)記不足、模板濃度低 | 優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，適量加樣 |
| 尺寸標(biāo)準(zhǔn)偏移或錯(cuò)位 | 標(biāo)準(zhǔn)品老化、軟件校準(zhǔn)異常 | 更換ROX標(biāo)準(zhǔn)并校正方法參數(shù) |
| 軟件無(wú)法識(shí)別進(jìn)樣盤(pán) | 樣本板未對(duì)齊或識(shí)別標(biāo)簽出錯(cuò) | 重新安裝樣本板并確認(rèn)樣品信息 |
為了獲得更高一致性與可重復(fù)性，推薦如下實(shí)驗(yàn)配置優(yōu)化措施：
采用統(tǒng)一批次試劑、耗材，減少批間差異；
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照樣本或陽(yáng)性模板，便于判斷系統(tǒng)性能；
所有實(shí)驗(yàn)流程操作人員應(yīng)接受統(tǒng)一培訓(xùn)；
對(duì)每輪實(shí)驗(yàn)運(yùn)行結(jié)果進(jìn)行記錄歸檔，便于追溯分析；
若開(kāi)展多重PCR或STR檢測(cè)，建議根據(jù)峰強(qiáng)、片段長(zhǎng)度優(yōu)化引物濃度比例。
賽默飛3500基因分析儀是一套高度自動(dòng)化、性能成熟的電泳系統(tǒng)，但其運(yùn)行效果極大依賴(lài)于實(shí)驗(yàn)配置的精準(zhǔn)與操作的規(guī)范。通過(guò)合理選擇聚合物、電泳參數(shù)、上樣比例及配套軟件，結(jié)合日常維護(hù)與科學(xué)管理，可以大幅提升實(shí)驗(yàn)通量與結(jié)果可信度。希望本文能為廣大用戶在配置設(shè)備與開(kāi)展實(shí)驗(yàn)過(guò)程中提供切實(shí)可行的參考。
